中山大学药剂学课件 第四章__灭菌与无菌技术.ppt

第四章 灭菌与无菌技术 灭菌法是指杀死或除去所有微生物包括繁殖体和芽胞的技术。细菌的芽胞具有较强的抗热能力，不易杀死，因此灭菌效果，常以杀灭芽胞为准。（应区分灭菌、防腐、消毒的概念） 第一节 物理灭菌法 包括加热、紫外照射、辐射、过滤等。 一、干热灭菌法：加热可以破坏蛋白质与核酸中的氢键，导致蛋白质变性或凝固，核酸破坏，酶失去活性，使微生物死亡。 1、火焰灭菌法 火焰直接烧灼灭菌——一般只适合耐火器材的灭菌； 2、干热空气灭菌法 高温干热空气灭菌，其灭菌温度和时间各有不同规定，如180℃1小时或160-170℃2-4小时等。本法缺点是穿透力弱，温度不均匀，灭菌温度高、时间长，有局限性。 二、湿热灭菌法：在饱和蒸汽或沸水或流通蒸汽中进行灭菌的方法。 湿热灭菌法蒸汽比热大，穿透力强，易使蛋白质变性，灭菌可靠；包括： 1、热压灭菌法 压力6.86×104-13.72×104Pa，温度115℃-126.5℃，时间15min-30min，能杀死所有细菌繁殖体和芽胞。 操作时必须注意：①必须使用饱和蒸汽；②必须将灭菌器内的空气排除；③灭菌时间必须由全部药物温度真正达到所要求的温度时算起；④灭菌完毕后停止加热，必须使压力逐渐降到0，才能放出锅内蒸汽，使锅内压力与大气压相等后，稍稍打开灭菌锅，待10-15 min，再全部打开。（避免由于压差、温差过大而使物品冲出、玻璃瓶炸裂） 2、 流通蒸汽灭菌法 100℃流通蒸汽30-60 min，有时要加抑菌剂，适于不耐高温的品种。 3、煮沸灭菌法 通常煮30-60 min，有时要加抑菌剂。 4、低温间歇灭菌法 先于60-80℃加热1小时，杀灭细菌繁殖体，然后放置温室24小时，让芽胞发育成繁殖体，再次加热将其杀灭。耗时。 三、其它 紫外灭菌：利用紫外光线进行空气灭菌和表面灭菌。 滤过灭菌：机械除菌---除菌滤过器，主要适用于对热不稳定的物质。如白陶土滤器、垂熔玻璃滤器、微孔滤膜等。 微波灭菌：微波是指频率大于300兆赫，波长小于1米，甚至小于1微米的高频率振动电磁波。 辐射灭菌：电离辐射产生射线如钴-60辐射。 超声波灭菌等。 如：单扉式灭菌箱、电热隧道式无菌烘箱、隧道式灭菌烘箱 第二节 F与F0值在灭菌中的意义与应用 F与F0值是验证灭菌可靠性的参数。 一、D值与Z值 1. D值 研究表明，微生物在被杀灭的过程中，其杀灭速度符合一级过程，即： dN/dt=-kN 或lgNt=lgN0-kt/2.303 式中，N0为原有微生物数，Nt为灭菌时间t时残存的微生物数，k为杀灭速度常数。 lgNt对t作图得一直线， 斜率=-k/2.303= （lgNt-lgN0）/t， 令：斜率的负倒数为D值， 则 D= 2.303/ k= t /（lgN0-lgNt）， 当lgN0-lgNt=1时，D=t， 即D的物理意义为，在一定温度下杀灭微生物90%或残存率为10%时所需的灭菌时间。 2. Z值 灭菌条件不同，其灭菌速率也不同，当温度升高时，k增大，D值就减小，在一定温度范围内（100-1380C）lgD与温度T成直线关系， 令Z=（T2-T1）/（lgD1- lgD2）， 或变为 D2/ D1=10（T1-T2）/Z， Z的物理意义是，Z值为降低一个lgD值所需升高的温度数。设Z=10 0C， T1=110 0C T2=121 0C，则D2/ D1=10-1=0.079，即1100C灭菌1min与121 0C灭菌0.079min效果相当。 二、F与F0值 1. F值 首先F=Δt∑10（T-T0）/Z，Δt是测量被灭菌物料温度的时间间隔，一般为0.5-1.0min，T则是每个Δt测得的被灭菌物料的温度，T0是参比温度。所以F的定义为在一定温度T下，给定Z值 所产生的灭菌效力与参比温度T0给定Z值所产生的灭菌效力相当时所相当的时间，单位是min（分钟），常用于干热灭菌。 2. F0值 这是一个在灭菌周期设计和验证中广泛应用的术语，但目前只限于蒸汽灭菌。 F0=Δt∑10（T-121）/10，T0=121 0C，Z=10 0C， ∴F0的定义为在一定灭菌温度T下，给定Z=10 0C， 所产生的灭菌效力与121 0C、Z=10 0C所产生的灭菌效力相当时所相当的时间，也就是说，不管温度如何变化，t分钟内的灭菌效果相当于温度在121 0C下灭菌F0分钟的效果。因此F0为标准灭菌时间。 F0值的计算对于灭菌周期设计和验证极为有效，它将温度与时间对灭菌的效果统一在F0值中。（将不同灭菌温度计算到相当于12