12-脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及bcl-2的表达.pdf

JF萼 2011Octoberv0145No5 u．ianMedUniv … … … 323 12一脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及 bcl一2的表达 陈丰霖 ，王小众，李建英，陈治新 ，黄月红 摘要 ： 目的 研究 12一脂氧化酶 (12一LOX)对 胃癌细胞中P21、bcl一2及磷酸化 ERK1／2(p-ERK1／2)表达 的影 响及与 ERK1／2信号传导通路的关系 。 方法 胃癌细胞 AGS常规培养于含 1o 胎牛血清 的RPMI-1640培养 液 中24h至对数生长期 ，改用无血清 RPMI一1640培养基培养 24h加入干预药物 。P21、bcl一2及 p—ERK1／2表达采 用 Westernblot法测定 。分别采用 100nmol／L 的 12一LOX催化合成产物 12一羟基廿碳 四烯酸 (12HETE)及 40“mol／L的 12一LOX特异性抑制黄苓素干预AGS细胞 24h，测定 P21、bcl2及 p-ERK1／2含量 ；采用 ERK抑制剂 PD98059预处理 AGS细胞 2h后 ，再分别用 100nmol／L的 12一HETE及 4O~tmol／L黄苓素干预 24h后再测定 P21、bcl2及 p-ERK1／2含量 。 结果 经 100nmol／L的 12：HETE干预 24h后 ，p-ERK1／2、P21、bcl一2均显著高 于末干预组 (P0．05)，而 40 mol／L黄苓素干预 24h后 ，PERK1／2、P21、bcl一2显著低于对照组 (P％0．05)；采用 ERK抑制剂 PD98059预处理 AGS细胞 2h后再分别用 100nmol／L的 12HETE及 40t~mol／L黄苓素干预与未采 用 PD98059预处理组相 比，PD98059预处理后 12一HETE干预组 bcl一2水平低于仅用 12一HETE干预组，PD98059 预处理后黄苓素干预组 bcl一2水平高于仅用黄苓素干预组(PO．05)。而 PD98059预处理后 2组 P21水平含量均 无明显差异。 结论 12LOX对 胃癌细胞P21及 bc[-2表达具有调节作用，12LOX通过其合成产物 12一HETE 促进 ERK1／2的磷酸化 ，并通过 ERK1／2途径调节 bcl一2的表达 ，P21的表达不受 ERK1／2途径调控 。 关键词 ： 胃肿瘤 ；脂氧化酶 ；花生 四烯酸类 ；原癌基 因蛋 白质 c—bcl2；原癌基 因蛋 白质 p21(ras)；肿瘤细 胞 ，培养的 中图分类号 ： R735．202；R341；R394．3 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1672—4194(2011)05—0323—04 脂氧化酶 (LOx)是催化体 内花生 四烯酸代谢 公司)；胰酶 (美 国Sigma公司)；小牛血清 (杭州 四 的两个关键酶之一。LOX同功酶 中 12一LOX及其 季青生物工程材料有限公司)；PD98059(美 国Up— 催化产物 12一羟廿碳 四烯酸 (12一HETE)与肿瘤关系 state公司)。磷酸化特异性 ERK1／2抗体、P21及 最为密切 ，笔者前期 的研究已证实 12一LOX通过其 bcl一2单克隆抗体 (美 国SantaCruz公司)。其余试 催化合成产物 12一HETE具有抑制 胃癌细胞凋亡的 剂均为国产生化试剂。 作用_1；同时 已有研究表 明，原癌基 因 ras的激活 1．2 方法 和／或其产物 P21蛋 白以及 bcl一2的过量表达与 胃 1．2．1 细胞培养 AGS细胞培养于含 10 胎牛 癌的发生和发展有关 ，12一LOX合成产物 12～HETE 血清的RPMI一1640培养液 中，在 37℃、体积分数为 能促进细胞内一些分子量在 40～50kD的酪氨酸蛋 0．05的CO。及 100 湿度条件下常规培养。培养液 白磷酸化 ]。因此 ，笔者对 胃癌细胞 中 12一LOX合 均含有 100U／mL青霉素及 100U／L链霉素。 成产物 12一HETE及 12一LOX抑 制剂 黄苓 素对 1．2．2 药物干预 AGS细胞培养 24h至对数生 ERK1／2的磷酸化及 P