ESI 的工作原理.docVIP

ESI 的工作原理是：内衬弹性石英管的不锈钢毛细管（内径约 0.1 mm）被加以3 ～5 kV的正电压，与相距约1 cm 接地的反电极形成强静电场。被分析的样品溶液从毛细管流出时在电场作用和辅助气流的作用下形成高电荷的雾状小液滴；在加热的气体作用下，液滴因溶剂的挥发逐渐缩小，其表面上的电荷密度不断增大。当电荷之间的排斥力足以克服表面张力时，液滴发生裂分，产生带电的更小微滴；这些液滴中溶剂再蒸发，此过程不断重复，直到液滴变得足够小、表面电荷形成的电场足够强，最终把样品离子从液滴中解析出来，形成的样品离子通过锥孔、聚焦透镜进入质谱仪分析器后被检测。 基质辅助激光解吸电离(Matrix-assist laser desorption/ionizatin, MALDI) 通过激光束与固体样品分子的作用是其产生分子离子和具有结构信息的碎片；所研究的是结构较为复杂、不易气化的大分子。 采用固体基质以分散被分析样品是MALDI 技术的主要特色和创新 之处。基质的主要作用是作为把能量从激光束传递给样品的中间体。此外，大量过量的基质（基质：样品=10 000：1）使样品得以有效分散，从而减少被分析样品分子间的相互作用。 基质的选择主要取决于所采用的激光波长，其次是被分析对象的 性质。 TOF--开始时，所有离子都在一起。小的离子移动的快，大的离子移动的慢。根据到达检测器时间的不同，而检测出不同质量的离子。可以采用两级加速或反射式提高仪器的分辨率 二维核磁共振谱： 是有两个时间变量，经两次傅利叶变换得到的两个独立的频率变量的谱图。一般用第二个时间变量 t2 t1 则是与 t2 无关的独立变量，是脉冲序列中的某一个变化的时间间隔。 预备期 (preparation period)：是一个较长的时期，它使实验前体系能回复到平衡状态。 演化期 (evolution period, t1)：在t1开始时由一个或几个脉冲使体系激发，使之处于非平衡状态。 t1是变化的。 混合期 (mixing period, tm)：建立信号检出的条件。混合期有可能不存在。 检测期 (detection period, t2)：以通常方式检出FID信号。 二维1H-1H 核磁共振基本实验： COSY:建立 a.a.残基内标量耦合1H核自旋 间的化学位移关联 1H 之间通过二键或者三键形成交叉峰 TOCSY:建立a.a.残基内1H核自旋 间的化学位移全关联 1H 之间通过接力传递跨键产生交叉峰 NOESY:建立a.a.残基内或者残基之间，偶極耦合1H 之间的NOE相关 两个1H 5? 时，产生NOE交叉峰 氨基酸序列指认 在指纹区(fingerprint region)作序列识别(sequential assignment )是有方向性的, 即由横向路径到纵向路径(1H(i→1HNi+1) 除了脯氨酸(Pro)和甘氨酸(Gly)，每个氨基酸残基都各包含一个1HN 和1H( 基本规则为: (1) COSY交叉峰横向引直线，找出在此线上的某一NOESY交叉峰。 该NOESY1H(与后一位氨基酸残基的1HN之间建立的。是表示氨基酸残基内的NOE相关。 (2) 再由该NOESY交叉峰竖向引直线，找出在此线上的某一COSY交叉峰。 (3) 由后一个COSY交叉峰重复上述步骤。 在1HN－1HN区域作序列识别。 HSQC: 建立a.a.1H-15N或1H-13C 之间的化学位移相关. 1H与异核（15N或13C）之间通过单键1JNH或1JCH形成交叉峰. HSQC-TOCSY: 建立a.a.1H 之间的化学位移全相关. 1H 之间通过1H-13C 之间的化学位移相关的介导而产生接力交叉峰. HSQC-NOE: 建立a.a.1H 之间的 NOE相关. 1H 之间空间距离小于或者等于5? 时，通过1H-15N或1H-13C单键1JNH相关的介导而产生NOE交叉峰. 二维异核波谱谱峰指认基本方法 自旋系统指认 (Spin system assignment) ——识别波谱中出现的交叉峰属于哪一类氨基酸残基 HSQC + HSQC-TOCSY的综合分析 氨基酸序列指认(Sequential assignment) ——识别正确的氨基酸残基的序列 HSQC + HSQC-NOE波谱的综合分析 确定二级结构(Determination secondary structure) 　—— (-helix; (-sheet; reverse turn; NOE connectivity pattern chemical shift index (13C()