1.1DNA重组技术的基本工具(2016最新版).pptVIP

专题一基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因工程的概念： 一种限制酶只能识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割（举例） 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用部位： 5、结果： 形成两种末端 一、“分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 磷酸二酯键 4、作用特点： 具有专一性 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 限制酶作用的结果 平末端　　　平末端 SmaI限制酶的切割 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 用某种限制酶切断的某个DNA分子，露出几个黏性末端？它们之间的关系怎样？ 思考: 2个 相同的黏性末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 易错点： 氢键的连接不是靠DNA连接酶来作用的！ 一、“分子缝合针” —— DNA连接酶 关于限制酶的几点说明： （1）限制酶是一类酶的统称，不是一种酶。不同类别的限制酶的识别序列、切割位点不同。 （4）限制酶本质是蛋白质，具有专一性，高效性，需要适宜的条件。 （2）限制酶的作用部位是磷酸二酯键，而不是碱基之间的氢键。 （3）限制酶切割外源DNA,使之失效，从而达到保护自身的目的！ （5）能被限制酶特异性识别的切割部位一般都有回文序列，也就是在切割部位一条链正向读的碱基序列与另一条链反向读的碱基序列完全一致。 类型 来源 功能 相同点 差别 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 大肠杆菌 T4噬菌体 连接磷 酸二酯 键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端(效率较低) 阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容，填写下表 DNA连接酶的种类 作为运载体必须具备哪些条件？ 1.能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2.具一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3.具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 4.对受体细胞无害。 基因的运输工具——运载体 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 练习题 1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 A 2.在基因工程操作中限制性核酸内切酶是不可缺少的工具。下列有关限制性核酸内切酶的叙述错误的是（　　） A. 一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B. 限制性核酸内切酶的活性受温度和pH等因素的影响 C. 限制性核酸内切酶可以从某些原核生物中提取 D. 限制性核酸内切酶也可以识别和切割RNA D 3.下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是（ ） A．①②③④ B．①②④③  C．①④②③ D．①④③② C 4.下列哪项不是基因工程中经常使用的运载目的基因的载体（ ） A．细菌质粒 B．λ噬菌体 的衍生物 C．细菌拟核中的DNA D．动植物病毒 C 5.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（ ）A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D