课件第11章 高效液相色谱法.pptVIP

* 11.5 高效液相色谱仪 high performance liquid chromatograph * * 液相色谱仪（2） * * 液相色谱仪（3） * * 液相色谱仪（4） * * 流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 流程 四个主要部分： 液体输送系统 进样系统 分离系统 检测系统 * * 11.5.1 液体输送系统 高效液相色谱仪器的输液系统包括贮液瓶、高压泵、梯度洗脱装置等。 1. 贮液瓶 （1）对贮液瓶的要求。 贮液瓶又称溶剂贮存器，主要用来供给足够数量的符合要求的流动相以便完成分析工作。对于溶剂贮存器的要求是： ①必须有足够的容积，以备重复分析时保证供液； ②脱气方便； ③能耐一定的压力； ④所选用的材质对所使用的溶剂都是惰性的。 * * （2）脱气方法。 贮液瓶常用的脱气方法有： ①低压脱气法。电磁搅拌、水泵抽真空。 不适于二元以上冲洗剂组成的流动相脱气。 ②吹氦脱气法。 此法简单方便，适用于所有冲洗剂脱气。 ③超声波脱气法。 将冲洗剂瓶置于超声波清洗槽中，以水为介质超声脱气。方便，不影响溶剂组成，并适用于各种溶剂，目前国内使用较为普遍。 使用此法时应注意避免将溶剂瓶与超声波清洗槽底或壁的接触，以免瓶子破裂。 * * 2. 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 （动画） * * 3.梯度淋洗装置 高压梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 低压梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 * * 11.5.2 进样系统 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： * * 11.5.3 分离系统 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 * * 11.5.4 检测系统 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 * * b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 * * * * 光电二极管阵列检测器 * * c. 示差折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱； 偏转式、反射式和干涉型三种； * * 示差折光检测器 * * d. 荧光检测器（fluorescence detector） 高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； * * 11.6 HPLC的应用 application of HPLC 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 * * 2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 * * 11.7、制备型液相