高浓度底物下青霉素扩环酶的活性评价与底物抑制 现象.pdfVIP

1690 生 物 工 程 学 报 伍林军 等/高浓度底物下青霉素扩环酶的活性评价与底物抑制现象 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn December 25, 2015, 31(12): 1690−1699 DOI: 10.13345/j.cjb.150057 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术 高浓度底物下青霉素扩环酶的活性评价与底物抑制 现象 1,2 1 1 1 伍林军 ，范可强 ，季俊杰 ，杨克迁 1 中国科学院微生物研究所 微生物资源前期开发国家重点实验室，北京 100101 2 中国科学院大学，北京 100049 伍林军 , 范可强, 季俊杰 , 等 . 高浓度底物下青霉素扩环酶的活性评价与底物抑制现象 . 生物工程学报, 2015, 31(12): 1690–1699. Wu LJ, Fan KQ, Ji JJ, et al. Evaluation of penicillin expandase mutants and complex substrate inhibition characteristics at high concentrations of penicillin G. Chin J Biotech, 2015, 31(12): 1690–1699. 摘 要: 本文对青霉素扩环酶 (Penicillin expandase ，也称Deacetoxycephalosporin C synthase ，DAOCS) 在高浓 度青霉素 G 下的底物抑制现象进行初步评价与表征，筛选适合工业应用条件的高活力突变体。我们通过HPLC 对已报道的几个DAOCS 高活力突变体在青霉素G 浓度5.6 至500 mmol/L 间的比活力进行定量测定，并与不 同催化反应动力学模型的理论推测变化趋势比较，发现DAOCS 野生型酶及高活力突变体H4 、H5 、H6 与H7 在高浓度青霉素G 条件下均表现出明显的底物抑制现象，但是变化趋势不同。野生型酶与突变体H4 的比活力 先上升后下降，与竞争性抑制模型预测不符。突变体H5 、H6 与H7 的比活力变化呈现更复杂的变化趋势。在 所有测试的突变体中，H6 的活性显著高于其他突变体酶。青霉素G 对野生型DAOCS 的底物抑制现象符合非 竞争性抑制模型的预测。而部分突变体表现出复杂的底物抑制行为，表明其具有更复杂的作用机制。在高底物 浓度下筛选具有较强催化活性的青霉素扩环酶突变体对于推动其在工业生产中的应用具有重要指导作用。 关键词: 去乙酰氧头孢菌素C 合成酶，底物抑制，高浓度青霉素 G Received: January 29, 2015; Accepted: March 13, 2015 Supported by: National Basic Research Program of China (973 Program) (No. 2013CB734001). Corresponding author: Keqian Yang. Tel/Fax: +86-10 E-mail: yangkq@ 国家重点基础研究发展计划 (973 计划) (No. 2013CB734001) 资助。 网络出版时间：2015-05-14 网络出版地址：/kcms/detail/11.1998.Q1403.002.html