实验一 细胞凝集反应与细胞膜的.ppt

实验一 细胞凝集反应与细胞膜的渗透性 [实验目的] 学习研究细胞凝集反应的方法，了解细胞发生凝集反应的原因 了解溶血现象及其发生机制。 掌握细胞膜通透性的实验方法。 观察并掌握相对分子量、脂溶性大小、电解质和非电解质对细胞膜通透性的影响。 [实验原理] （一）细胞凝集反应 细胞膜是由脂类双分子层镶嵌蛋白质构成的单位膜，而脂类和蛋白质又与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。 Erythrocyte Membrane Skeleton 细胞质膜外表面的一层黏性多糖物质，如动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中伸向膜表面的糖链，在细胞间的联系和识别、细胞的生长分化、细胞免疫、细胞接触抑制及肿瘤发生等过程中发挥着重要作用。 凝集素是一类含糖(少数例外) 、并能可逆结合特异糖基的蛋白质，与糖的运输、储存物质的积累、细胞间相互作用及细胞分裂调控等有关，具有使细胞凝集、血型鉴定、促进淋巴细胞分裂、防害抗虫等作用。 凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被的寡糖链相连接，在细胞间起到“桥”的作用。 凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。 加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生凝集。凝集素与糖结合的活性及专一性决定其功能。 （二）细胞膜的渗透性 细胞膜是细胞与环境间进行物质与能量交换的一种选择性通透屏障，可选择控制不同物质进出细胞。水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。 扩散与渗透 将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。 溶血时光线较容易通过溶液，使溶液呈现透明即溶血。 红细胞膨胀与收缩 将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。 溶质分子进入红细胞?细胞内溶质浓度增加?细胞内渗透压增加?胞外水分进入红细胞?细胞膨胀破裂?细胞膜破裂，血红素溢出即红细胞发生溶血 在不同相对分子量、脂溶性大小以及电解质和非电解质等各种溶液中， 红细胞质膜对各种溶质的渗透性不同。 不同物质透入细胞的速度不同，发生溶血所需时间不同。 发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标,从而测量各种物质通透性的差别。 限制因素 各种物质跨膜运输的方式是不同的，物质的通透性是由物质本身属性和膜的结构性质（如脂溶性、分子大小、所带电荷等）共同决定的；另外物质穿膜的通透性还要受到细胞生理状态和环境条件（如麻醉剂、热、辐射、pH值、盐不平衡等）的影响 不同浓度相同电解质/非电解质 单位面积所含分子数相同，即有相同的渗透压；同样浓度下,电解质产生的渗透压往往大于非电解质。 等渗系数i＝溶液1的等渗物质量浓度/溶液2的等渗物质量浓度 相同浓度不同电解质： 相同浓度不同非电解质： 相对分子量大小：小分子易进入 脂溶性大小：碳链越长，脂溶性越大 [实验用品] 器材:载玻片，显微镜、天平、滴管、5ml移液管、试管、试管架等 材料: 鸡血细胞 试剂:土豆凝集素、韭菜凝集素、PBS缓冲液、0.17mol/L氯化钠、 0.17mol/L 氯化钾、 0.17mol/L 氯化铵、0.32mol/L乙醇、 0.32mol/L甘油等 实验方法---制备血细胞 从集市买一只活鸡现杀取血5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever,s 液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2 周内使用）。 2. 使用前取用Alsever,s 液保存的新鲜鸡血5ml，加入8ml的0.128 mol/L 的NaCl 溶液，小心混匀，1000 r/min 离心5min，如此3 次洗涤，最后配成25%的鸡红细胞（CRBC）悬液。 [实验方法] (一) 细胞凝集反应 1 凝集素制备：土豆凝集素、韭菜凝集素 2 细胞凝集反应 　　　凝集素 　　1 滴 　　　2%鸡血红细胞液　 1 滴 载玻片上混匀，镜检 静置20min后,再镜检 3　对照 　　　PBS　 　　　　　１滴 　　　2%鸡血红细胞液　 １滴 载玻片上混匀，镜检 静置20min后,再镜检 （二）细胞膜的渗透性 1 低渗溶液 　　　试管一支： 　　　25％鸡血红细胞液　　0.1ml 　　　ddH2O??????????? 2ml ???? ?轻摇混匀，观察颜色变化，若有溶血[溶液由不透明的红色（隔着它看不到试