运用套式PCR检测传染性喉气管炎病毒核酸.PDFVIP

维普资讯 第 16卷 3期 中 国 病 毒 学 t6(3)：265—269 2001年 9月 VIROLOGIGSLXIC_A Septerd3er 2001 运用套式 PCR检测传染性喉气管炎病毒核酸 黄庚明 ，辛朝安。 (1广东省农业科学院兽医研究所，广东广州510640； 2．华南农业大学动物医学系，广东广州510642 DetectionofIlffeetiousLaryngotracheitisVirusbyNestedPCR HUANGGeng—ming，XDqChao—a／1 (．VeterinaOMefficineInstituteofC．~2angdongAcademy drⅫ如 Sciences．~71tgg210U510640，Chiwz 2DepartmentofVeterinaryMeddcine，SouthOdna Univers啦． ∞ 510642，‰ ) Abslraet：Twopairsofolignoucleotidesflanking33aymidineKinase(TK)seonentofinfectiouslaryngotracheifs virus(Ⅲ )werechosenasprimersofrpolymerasechalnreaction(nestedPCRj． emethodofnestedPCR W~LS．usedtodetectofvirusDNAinILTVinfecteddifferentchorlollantoicmembrane，specimensfrom laboratoO, and7clinicalspecimensfromvariousspecies，mILTVgeneTKseglllentp1 dDNAaspositivecontro1． ThevlmsDNA wasextractedbyacidguanidinium htlocyanate-phenol—chloroform slngle-stepmehtod ．Th ere— suhssho,a-de htatallⅡ Vinfectde differentchorloUantoicmemb ranewerepositive．Thehighestdetectionrate ofⅡⅣ from trachealswabsofIqno—hnmmtizedchickenwas7／10onthetenht dayP．i．．nadthatfrom tracheal swal3~ofSPFchickenswas8／10onhtetenthdayP．i．．Thebesttimefor唧 detcetionintrachealswabs fmm bothrloii—nimmnizedchickens andSPFchickenswastheffithdayP．i． detectionfrom clinical蚋m— plesbynestedPCRW~LS．atarateof7／7．To~,erifythenucleotidehybridizationtest thTKcprobe ．itsuggests thatnestedPCR issensitive，specific，rapidmadsimple，andcanbe印 edofrstudyofpathogenesisonmoice— ularlevelnadforearlyclinicaldiagnosis． Keywords：Infcetiouslaryngotracheitisvirus(ILTV)；Thyafidinekinase(TK)gene；NestedPCR；．Detcetion 摘要：选择鸡传染性喉气管炎病毒保守TK基因的蛋白编码区域