PEG化重组尿酸氧化酶蛋白含量测定方法研究.pdfVIP

生 技 术 通 讯 v… … 542 LETTERSINB10TECHNOLOGY VOI．ZD1~O．q-Juu1．’，，2014 TT doi：10．3969／j．issn．1009—0002．2014．04．021 研究报告 PEG化重组尿酸氧化酶蛋白含量测定方法研究 李晶 ，苑方园 ，程速远 ，张慧 ，梁成罡 1．中国食品药品检定研究院，北京 100050；2．昆明理工大学，云南 昆明 650504 [摘要] 目的：以未修饰的原型蛋白为对照品，建立准确测定2种聚乙二醇化重组尿酸氧化酶(PEG—rUOX)含量的方 法。方法：以原型蛋白rUOX为对照品，利用凝胶色谱法测定PEG—rUOX中的蛋 白含量，通过详细的专属性、精密度、 准确性等方法学考察，建立该方法。色谱条件：采用TSKGel5000Pwxl(300mmX7．8ram)凝胶色谱柱，以含0．15 mol／L氯化钠的0．05mol／L的Tris—HC1溶液(pH9．0)为流动相，流速0．5mL／min，柱温为室温，检测波长280nm。结 果：在280nm下，2种rUOX在200～1000Ixg／mL浓度范围内线性关系良好(r分别为 1和0．9999)，其高、中、低平均回 收率均较高，为98．33％一99．96％。结论：本方法专属性、精密度和准确性 良好，可作为PEG—rUOX的含量测定方法。 [关键词] 聚乙二醇化重组尿酸氧化酶；凝胶色谱；蛋白含量 [中图分类号] Q503 [文献标识码] A [文章编号] 1009—0002(2014)04—0542—05 Studieson Determination ofProtein Contentin PEG—rUoX LIring，YUAN Fang—Yuan，CHENG Su—Yuan，ZHANG Hui，LIANG Cheng—Gang 1．NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing 100050； 2．Kunming UniversityofScienceandTechnology，Kunming650504；China Correspondingauthor，E—mail：liangchenggang@nifdc．。rg．cn [Abstract] 0bjective：Todevelopanassaymethodofr2kindsofpegylatedrecombinanturateoxidase(PEG— rUOX)by using unmodified protein as areference substance．M ethods：rU0X and a SEC—HPLC methodwere used to determinethe protein contentofPEG—rUOX．Thismethodwaswellestablished byvalidation on thespeeif— ity．precision and accuracy．Theassay was performed on aTSK Gel5000PWxlColumn(300 mE×7．8 mm)at 25℃ with themobilephaseof0．15mol／LNaC1—0．05mol／L Tris—HC1solution(pH9．0)．Theflow ratewas0．5 mL／ min and the detection wavelength wassetat280 nm．Results：Two kindsofrUOX showed a good linearrelation． shipintherangeof200-1000I-~g／mL(r2were1and0．9999．respectively)andtheiraveragerecoveriesweregood (98．33％一99．96％)．Conclusion：ThemethodiSs