Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T细胞白血病Molt-4细胞周期和凋亡的影响 (1).pdfVIP

浙江理工大学学报，第29卷，第4期，2012年 7月 JournalofZhejiangSci—TechUniversity Vo1．29，No．4，Ju1．2012 文章编号：1673—3851(2012)04—0589—05 Hsp90抑制剂 BIIB021对人急性 T细胞 白血病 Molt一4 细胞周期和凋亡的影响 李 敏 ，曹 慧 ，钱文斌 (I．浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所，杭州310018； 2．浙江大学医学院附属第一医院 血液病研究所，杭州 310003) 摘 要：为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞 白血病细胞株 Moh-4增殖和凋亡的影响，采用 MTT法检测 了BILBO21对 Molt一4细胞增殖 的影响，Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化 ，流式细胞 术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变，Westernblotting检测 BILBO21对细胞周期和凋亡相关蛋 白的影响。 结果显示：BIIBO21以时间和剂量依赖性方式抑制Molt一4细胞增殖，48、72h的IC50分别为 384．6nmol／L和 301．8 nmol／L；Hoeehst33258染色可观察到细胞内出现凋亡小体，且随着药物浓度增大，凋亡小体的数 目也逐渐增 多；流式 结果同样显示，随着药物浓度升高，细胞凋亡率逐渐上升，400nmol／LBILBO21可诱导细胞凋亡率达34．4％0；另外， BIIBO21可显著阻滞细胞于g0／G1期；Westernblotting显示BILBO21激活Caspase~8、一9、一3和PARP，下调CDK4／6， 上调p21和p18，并能明显抑制Akt和p65。由此表明，BILBO21能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt一4细胞 凋亡，并通过影响CDK4／6和p21、p18使得 Molt-4细胞被阻滞于G0／G1期，抑制细胞增殖；BILBO21对 Mott-4的 Akt和NF-KB也有抑制作用。 关键词：Hsp90抑制剂；BIIBO21；急性T淋巴细胞 白血病；细胞凋亡；细胞周期 中图分类号：Q733．7 文献标识码 ：A Hsp90的伴侣蛋 白有 200多种，涵盖了几乎所有的 0 引 言 细胞过程。许多已知的伴侣蛋 白都属于蛋 白激酶或 急性淋巴细胞白血病 (acutelymphoblasticleu 转录因子，如 Bcr—Abl、EGFR、c—Met、IGF1一R、c_ kemia，ALL)是 由于原始及幼稚淋巴细胞在造血组 Src、Akt、ERK、CDK4、Raf-1、类 固醇激 素受体、 织异常增殖并浸润全身各组织脏器的一种造血系统 p53、Stat3、Mdm2和端粒酶等[2]，这些蛋 白激酶和 恶性克隆性疾病。ALL可分为急性B淋巴细胞 白 转录因子涉及与细胞增殖相关的多条信号转导途 血病(ALL)和急性T淋巴细胞 白血病 (T-ALL)。 径。抑制 Hsp90的活性，能够同H-,t~l发多条信号转 化疗是T_ALL的主要治疗手段，但复发率高、预后 导途径中关键蛋 白降解，达到Klein等Ⅲ5]提出的 “肿 差[】]，因此，亟待寻找新的抗肿瘤药物和治疗方案 。 瘤多点攻击”的 目的。目前，以Hsp90作为抗肿瘤 Hsp90是一种高度保守并且广泛存在于原核 的分子靶点已经受到广泛关注 。 及真核生物中的热休克蛋白。Hsp90通常与热休克 BIIB021／CNF2O24是一种人工合成的嘌呤骨 蛋 白家族其他成员如 Hsp70、Hsp40、p60／Hop和 架类 Hsp90抑制剂，它能竞争性地结合于 Hsp90 p23等形成复合体，在ATP的参与下，促进伴侣蛋 的N末端 ATP／ADP结合域，破坏细胞增殖、分化 白的正确折叠并维持其构象稳定。有研究表明， 过程中关键蛋 白的稳定性，从而诱导细胞凋亡。研 收稿