影响小鼠非手术胚胎移植技术的因素.pdfVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　２０１７（１１上）：７５－７８，２９３ 影响小鼠非手术胚胎移植技术的因素 １ １ １ ２ １ １ 蒋　瑞 ，刘若男 ，苗艳平 ，郝赞艮，周荣艳 ，李相运 （１．河北农业大学 动物科技学院，河北 保定０７１０００；２．康地饲料（天津）有限公司， 天津３００３０１） ＋ 中图分类号：Ｓ８６５．１３；Ｓ８１４．６ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００４－７０３４（２０１７）１１－００７５－０５ 关键词：小鼠；非手术胚胎移植；胚胎丢失；子宫损伤；子宫收缩 摘　要：小鼠胚胎移植是胚胎工程领域的一项重要技术，是制作嵌合体动物、转基因动物和克隆动物 的必需环节。小鼠胚胎移植分为手术法和非手术法移植。相对于手术法移植，非手术法简单快捷，对 试验动物伤害小，无需担心术后感染等问题，但是较低的移植成功率限制了该技术的推广和应用。文 章从假孕鼠、麻醉剂、移植器械、移植技术、激素等方面综合阐述影响小鼠非手术胚胎移植效率的因 素，并提出一套行之有效的改良方法，可大大提高移植效率，促进该技术的广泛应用。 　　小鼠胚胎移植是胚胎工程领域的一项重要技术， 非手术移植过程中的每一个细节，包括假孕鼠、麻醉 是制作嵌合体动物、转基因动物和克隆动物的必需环 剂、移植器械、移植技术、激素等，以求对移植技术进 节。小鼠胚胎移植方法分为手术法和非手术法。手 行改良。文章综述了影响小鼠非手术胚胎移植效率 ［１］ 术法移植成功率较高，应用较广泛 。但在手术时， 的因素，并建立了一套高效的小鼠非手术胚胎移植方 需在麻醉受体鼠背部开口，暴露子宫，由玻璃管将胚 法，以使该技术尽快在国内外推广和应用。 ［２］ 胎送入子宫，最后缝合切口 。该过程操作时间长 １　麻醉剂对非手术法胚胎移植的影响 且烦琐，对母鼠的伤害大，容易增加感染的风险。而 　　麻醉可以避免因试验操作而引起的受体小鼠的 非手术法胚胎移植简单快捷，对试验动物损伤小，可 恐慌，使小鼠痛苦最小化，避免产生一系列不利于试 ［３］ 大大简化胚胎移植的操作过程 。非手术法出现较 验的反应，因此胚胎移植时的麻醉是非常必要的，受 晚，最早出现在 １９５１年，研究者起初直接利用 １ｍＬ 体是否麻醉显著影响胚胎移植效率［６－９］。在非麻醉 的注射器连接材质坚硬的针头进行移植，结果移植 状态下，小鼠子宫颈口受到刺激后会发生肿胀且子宫 ５９枚胚胎仅得到了５只仔鼠，虽然成功率很低，却首 收缩加剧，这可能会导致移入的胚胎被挤出子宫角。 ［４］ 次证明了小鼠非手术胚胎移植的可行性 。１９７４ 而在麻醉状态下，子宫的收缩活动相对减弱，有利于 年，研究者使用由解剖显微镜、微量吸液管、聚乙烯管 胚胎在子宫内的沉积，降低了胚胎由于子宫收缩而被 连接的微量注射装置进行胚胎移植，更加精确地控制 挤出子宫角的可能性。同时，子宫颈口松弛，子宫平 了移植液的体积，移植成功率最高为５０％，但是这个 滑肌的张力和强度降低，也会减少移植器械对子宫内 过程使用的移植装置不便捷，需要两个人配合完成， 膜的损伤［５，１０］。笔者采用两种不同的麻醉方式（阿佛 而且移植导管进入子宫较深，对子宫损伤较大，影响 丁全身麻醉、利多卡因或丁卡因子宫颈局部麻醉）进 ［５］ 胚胎着床 。近几年，由微量移液器和塑料毛细管 行非手术胚胎移植，结果见表１。 连接制成的微量移植装置被逐步使用，且移植过程简 单易行，只需一个人就可完成，但移植成功率仍然很