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小鼠、大鼠的基本实验技术和方法 第二军医大学实验动物学教研室 孙 伟 动物实验 动物实验前的准备 动物实验的选择 根据实验目的选择合适的实验室及实验室 动物实验室要与实验动物同等级别 饲养室应符合实验动物的生活习性及国家实验动物设施各项标准 实验中常用品种及品系 近交系小鼠 C57BL、C3H、BALB/c、DBA/2等 封闭群小鼠 昆明小鼠 ICR小鼠 NIH小鼠 近交系大鼠 F344、SHR、ACI 封闭群大鼠 SD Wistar 实 验 要 求 操作时按照实习步骤，以严肃认真的态度进行。 注意爱护动物和仪器。 实习结束时，要整理用具，清洗器械，将实验用具归还原处。 动物尸体集中于一盒内，放到焚尸炉处。 1、 小鼠的抓取与固定 抓取步骤 固定方法 大鼠的抓取与固定 2、 雌雄鉴别 根据生殖器和肛门的距离来进行判断； 成年雌性动物，小鼠有5对乳腺；大鼠有6对乳腺。 3、 动物的编号 染色法 3%-5%苦味酸涂皮毛法 2%的硝酸银溶液（咖啡色） 剪趾法 耳缘打孔法 挂牌法 国外最新技术：芯片皮肤埋植法。 4、 实验动物皮毛的去除方法 为了排除动物被毛对实验操作和观察结果的影响，实验中需要去 除或剪短动物的被毛。 1 剪毛法 2 拔毛法 3 剃毛法 4 脱毛法 5、给药方法 经口给药 自动口服给药 该法一般适用于动物疾病的防治、药物的毒性观察等。 小鼠强制灌胃给药 进针深度3cm 灌胃量 小鼠30g以上：1.0ml； 25-30g：0.8ml； 20-24g：0.5ml 大鼠强制灌胃给药 进针深度4-6cm 灌胃量 1.0-2.0ml/100g体重； 通常1-4ml 注射给药 小鼠皮下注射 部位：颈背、侧腹。 进针深度5~10ml 注射量为0.1~0.3ml/10g体重 用注射器或套管针。 大鼠皮下注射 小于1ml/100g体重 腹腔注射 小鼠 进针角度为45度 进针3-5mm 一次注射量为0.1-0.2ml/10g体重。 大鼠：一次注射量1-2ml/100g体重 尾静脉注射 一般用4号针头或儿科头皮针 选尾静脉下1/3处，呈30度角度注射 小鼠一次注射量0.05~0.1ml/10g体重。 大鼠一次注射量0.5~1.0ml/100g体重。 体液的采集方法 采血方法 断头采血法X 摘眼球采血法X 剪尾采血 眼眶静脉采血 中等血量 用毛细玻璃管或镊子刺 小鼠：体重20-30g每次采血0.2~0.3ml 大鼠：体重200g左右每次采血2~3ml 尿液的采集 代谢笼法 通常用代谢笼装置，收集尿液、粪便和呼出的co2。 反射排尿法 处死方法 安死术的概念：即安乐死术，是指以人道的方法处死动物的过程。在处死动物的过程中减少动物的惊恐或焦虑，安静地、无痛苦地死亡。 原则： 应尽量避免因处死不当而造成病理损伤 应尽量使动物快速、安静、 无痛苦地死亡。 颈椎脱臼法 污物的无害化处理 污物应分类收集，实验动物废垫料与实验废弃品要分开，不得混放。 实验后收集的污物要用污物处理容器，进行盛装。然后汇总于专用污物袋中进行一次性封闭处理。 有机垃圾盛装器应密封有盖，防渗漏、防蝇、防鼠、并便于搬运及消毒。 污物的无害化处理 一次性口罩、帽子等使用后应装入专用垃圾袋回收焚烧处理。 一次性使用的注射器、针头、手套等物品使用后经消毒剂浸泡清洗，毁形后按要求统一进行无害化处理。绝不可自行处理和随意扔掉。 进行放射性实验所产生的废弃物，如果属于短半衰期且放射性较低的物品，放置6-10个半衰期后可以焚化处理。其他放射性废弃物，应进行中、长期安全包装后送放射性废物处理站处理。 用过的废垫料要装入垃圾袋中或专用的垫料容器内，注意防蝇、防渗漏，并及时焚烧处理。 废弃动物及动物尸体无害化处理 实验结束后，受试动物尚未死亡，应采用安死术处理，并将动物尸体装入专用尸体袋中存放冰柜待统一焚烧。 如实验过程中怀疑受试动物是因其它疾病死亡，应及时查明原因。动物尸体经消毒处理后装入尸体袋中，冷冻待焚烧处理。 较大受试动物尸体需经过适当肢解后再进行焚烧 焚烧效果应以污物全部化为灰烬为标准。 小鼠解剖步骤 小鼠称重 麻醉 麻醉药品：戊巴比妥钠、硫喷妥钠、水合胺醛、氯胺酮、乙醚等。 常规按75mg/kg体重的戊巴比妥钠（7.5mg/ml）腹腔注射即0.1ml/10g体重 大鼠：按40mg/kg体重的 腹腔注射3%戊巴比妥钠 仰卧固定 胸腔脏器 腹腔脏器 实验分组 A组 20073023