分析3126班-第四组-王旭-28号.docVIP

吉林工业职业技术学院 分析检验方案设计与实施综合报告 题目： 凯氏定氮法测大豆中总氮含量的实验条件分析 姓 名： 王旭 学 号： 28号 专业班级： 分析3126班 指导教师： 姜老师 王老师  凯氏定氮法测大豆中总氮含量的实验条件分析 摘 要 将蛋白质样品在硫酸铜的催化下，用氧化性试剂消化分解转化为铵离子，然后将含有铵试液置于蒸馏瓶中，加高浓度碱使铵离子转化为氨，然后与硫酸结合生成硫酸铵，再加热蒸馏，用过是的标准硼酸溶液吸收氨气，再用盐酸标准溶液滴定H2B03，以甲基红作为指示剂，测出含氮量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白质含量。 关键词：凯氏定氮仪;最佳条件;消化时间;蒸馏。 目 录 摘 要 I 第1章 前言 3 1.1 本课题的来源、目的及意义 3 1.2 课题背景及国内外研究现状 3 第2章 实验部分 4 2.1 实验原理 4 2.2实验药品与仪器 4 2.3 实验内容 5 2.3.1 0.1mol／L盐酸标准溶液的配制与标定 5 2.3.2 样品消化 5 2.3.3 滴定 5 第3章 结果与分析 6 3.1国家标准测定结果 6 3.2实验最佳条件确定及过程分析 7 第4章 结论 8 致谢 9 参考文献 9 第一章 前言 蛋白质在生物体内占有特殊的地位，它和核酸是构成原生质的主要成分，是生命现象的物质基础。食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源。具有糖类和脂肪不可替代的作用。作为生命的物质基础之一，蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用。蛋白质的分离与定性、定量分析是生物化学和其他生物学科、食品检验、临床检验、疾病诊断、生物药物分离提纯和质量检验中最重要的工作。蛋白质是由a一氨基酸以酰胺键(肽键)相结合形成的结构极其复杂的高分子化合物，是生物体中的主要含氮物质。蛋白质与细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质转运和遗传等密切相关，蛋白质测定方法一般可分为间接方法和直接方法。间接方法是通过测定样品中蛋白质的含氮量进行推算蛋白质含量的方法。直接方法则是根据蛋白质的物理和化学性质，直接测定蛋白质含量的方法。蛋白质是生物体中含量最高，功能最重要的生物大分子，与生命的起源和进化都密切相关，因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。关于蛋白质的分析研究，一直是化学家及生物学家极为关注的问题，其含量的测定在生化分析和临床分析中具有重要意义，研究和开发新的、高灵敏度的蛋白质测定方法是生物化学研究的一个活跃领域。测定蛋白质的方法不断发展，主要有凯氏定氮法(国际经典测定方法)、分光光度法、电化学法、滴定法、高压液相色谱法、电泳法、免疫法等。了解各种蛋白质测定方法的原理和技术特点，对在实际工作中选择适宜的分析方法具有重要的指导意义。 蛋白质是食品检验中经常进行检测的项目。测定食品中蛋白质的含量，了解食品的质量，为合理配膳提供数据，保证不同人群对蛋白质的需要，掌握食品的营养价值和品质的变化，以达到合理利用食品资源。近年来，人们发展了许多测定蛋白质的方法，如双缩脲法、分光光度法、凯氏定氮法、紫外吸收法、染料结合法、质谱分析法等，质谱分析是测定结果最准确的测定方法；凯氏定氮法适用范围最广泛，分光光度法是最为简便快速的测定方法，但就方法的准确性、精密度以及应用程度而言，国际经典测定方法一凯氏定氮法为首选 ，该法也是相关专业学生必须掌握的经典试验方法之一。现在尽管有很多先进的自动或半自动凯氏定氮仪，但这些仪器不仅价格昂贵，且需专门试剂，目前尚难普及，而对大批量的学生试验更不适合，所以凯氏定氮法适用范围是目前分析含氮化合物最常 用的方法。 第二章 实验部分 2.1 实验原理 利用硫酸及催化剂与样品加热消化，使蛋白质分解，其中C、H形成CO2 和H2O逸出，而蛋白质中的氮则转化成(NH4)2SO4，在强碱条件下加热蒸馏，其中NH3被硼酸吸收为(NH4)2B4O7，然后用标准的盐酸溶液滴定，根据盐酸的消耗量和浓度计算出氮的含量，乘以蛋白质系数，即为蛋白质含量。 反应式如下： 2CH3 —CH一C00H+13H2SO4= (NH4)2SO4+6CO2↑+12SOz↑+16H2O | NH2 (NH4)2SO4+2NaOH=2NH3↑+NazSO4+2H20 2NH3 +4H3BO3 = (NH4)2B4O7+5H2O (NH4)zB4O7+2HCl+5