基于TaqManMGB探针的花生矮化病毒检测研究.pdfVIP

垃 镳如 2010,36(3)：121—124 PlantProtection 基于 JhqManMGB探针的花生矮化病毒检测研究 闻伟刚， 谭 钟， 张 颖 (宁波出入境检验检疫局 ，宁波 315012) 摘要 花生矮化病毒 (Peanutstuntvirus，PSV)是我国进境检疫性有害生物。本研究根据该病毒不同分离株外壳 蛋 白基因(coatprotein，CP)的保守序列，设计 了特异性引物与TaqManMGB荧光探针，建立了PSV的实时荧光 RT-PCR检测方法。方法特异性研究表明，针对PSV的 2个不同株系PSV-E和 PSV-W，均能够得到典型扩增曲 线， 值分别为2o．1o和 21．22；而对于黄瓜花叶病毒、番茄不孕病毒、马铃薯Y病毒、菜豆荚王证驳病毒以及烟草环 斑病毒等其他毒株则没有典型扩增曲线，也无 值。灵敏度比较发现，该方法比普通 RT-PCR检测方法的灵敏度 提高 100倍，具有快速 、灵敏和高特异性的优点，适合对PSV的检测。 关键词 花生矮化病毒； TaqManMGB探针； 实时荧光RT-PCR； 检测 中图分类号： S432．41 文献标识码： A DOI： 10．3969／j．issn．0529—1542．2010．03．029 DetectionofPeanutstuntvirususingTaqM anMGB probe W enW eigang， TanZhong， ZhangYing (NingboEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，M 幻 315012，China) Abstract Peanutstuntvirus (PSV)hasbeenlistedasanimportantquarantinepestbyChinesegovernment．In thisstudy，area1．timefluorescentRT-PCR methodwasestablishedbasedonspecificprimersandTaqManM GB probedesignedinaccordancewiththeconservedsequencesofthecoatproteingeneofdifferentPSV isolates．Spe- cificitystudiesshowedthatforthetwodifferentPSV strainsPSV—E andPSV．W ，atypicalamplificationcurvecan beobtained，with Ctvaluesas20．10and21．22，respectively．NotypicalamplificationcurvesandCtvaluescould be obtained fortheCucumbetmosaicvirus，Tomatoaspermyvirus，Potato virusY，Bean podmottlevirus， Tobaccoringspotvirusandothervirusstrains．Sensitivitycomparisonsindicatedthatthemethod could improve sensitivityby100timescomparedwithregularRT-PCR method．Thereal—tmiefluorescentRT—PCRwasarapid， sensitiveandhighlyspecificmethodfordetectionofPSV ． Keywords PSV ； TaqManMGB probe； real—timefluorescentRT—PCR； detection 花生矮化病毒(Peanutstuntvirus，PSV)属于 针对 花 生矮 化病 毒 的检 测 已有 血清 学 与 黄瓜花叶病毒属，病毒粒体球形，直径约3Onm。该 RT-PCR方法l4]。随着分子生物学检测技