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HE染色法 HE染色法 整个染色过程包括五个内容：脱蜡,染色,脱水,透明和封固。 (一)脱蜡: 1.从温箱中取出烤干的切片,立即投入二甲苯中脱蜡5～10min(可在二瓶中进行),脱蜡时间长短取决于蜡是不彻底溶解。气温低可延长时间,气温高可适当缩短时间或在温箱中加速脱蜡。 2.移入无水酒精(100%)(二瓶)中,约2min。 3.移入90%酒精中(二瓶),约2min。 4.移入80%酒精中(二瓶),约2min。 5.移入70%酒精中,约2min。 6.移入水中,洗去酒精,约2～3min。 7.移入蒸馏水中,约2min。 (二)染色: 1.移入苏木素中,浸染8～15min,一般以稍深染为宜。 2.移入水中,洗去苏木素和浮色,约1～2min。 3.移入分化液(1%盐酸酒精)中,分化几秒至30秒钟, 使切片褪色至淡兰红色即可。分化的作用,可使细胞浆兰色脱去,而细胞核更加清晰,鲜丽,分化不足时,胞浆带兰,胞核过染,分化过度时,胞核太淡,难以辩认,可再退回苏木素染液, 延长一定时间。 4.移入流水中,洗涤30～60min,使组织呈鲜兰色或天兰色(兰化)。 5.移入伊红液中,浸染2～5min,如着染缓慢 , 可在伊红液中加入冰醋酸 (100ml伊红液加1～2滴冰醋酸)以助染。 6.移入水中,洗去伊红浮液,并用纱布擦净玻片上的多余染料。 (三)脱水: 1.吸去玻片上的水分后多入80%酒精中,(二瓶)脱水,约1～2min, 如在酒精中褪色很快时,可迅速移入90%酒精或返回伊红液中复染。 2.移入90%酒精中(二瓶)脱水,约2～4min。 3.移入无水酒精(100%酒精)(二瓶)彻底脱水,约4～8min。 (四)透明 1.移入二甲苯Ⅰ中透明3～5min。 2.移入二甲苯Ⅱ中透明5～10min。 (五)封固: 用树胶封固,先从二甲苯Ⅱ中取出切片,将组织外围的二甲苯迅速擦去,在滴上一滴树胶于组织片上,然后取干净的盖玻片,仔细加在封固剂上,慢慢压平, 使盖片位置适中。切片封固后,放在温箱中烤干,或平置凉干后装盒。 注意事项:为使切片制作更符合质量标准或最佳。除按步骤严格进行外, 还应注意以下几点: 1.用含升汞的固定液固定的组织块,在切片染色前,应进行脱汞,具体方法:切片脱蜡,逐次进入70%酒精后,入稀碘液(碘1克,碘化钾2 克,蒸馏水3000ml)内5～10min。蒸馏水稍洗,入5%硫代硫酸钠溶液内5min。蒸馏水充分洗后进入染色。 2.组织块在4～5倍稀释的福尔马林液中固定过久,经常产生一种褐色素 ,叫福尔马林色素。这种色素不溶于水和酒精,但影响组织观察。以在脾、肝、肺发生充血、出血和渗血的组织中最常见,因此,切片在染色前经脱福尔马林色素的步骤。其方法:切片脱蜡,浸水后,投入伟勒卡依氏溶液(1%氢氧化钾液1ml, 75％酒精200ml)20分～2h ,充分水洗后染色。 3.如组织片含有大量黑色素时,影响染色和检查,可在脱蜡后,浸水后用0.25%高锰酸钾胶2～4h ,然后,常水充分洗涤,或经1%草酸液脱去切片上的黄褐色后,再充分水洗,后进入染色。 4.在切片染色后,进行脱水时,当通过90%酒精后,应对切片进行仔细擦试,此时,把切片中组织片周围的污染涂色或水分用纱布(清洁)擦干净。当切片从 100%酒精出来时,也要认真仔细擦去污物及组织片附近的水分。这样即可使组织脱水彻底,还可使酒精浓度不至明显降低尽量保持酒精原浓度。 5.封固时,可使灵活操作,一种方法是先在盖玻片上滴半滴树胶,再将载玻片从二甲苯Ⅱ中取出。擦去切片外围的二甲苯,翻转载玻片, 使有组织的一面朝下,正好与盖玻片对准组织片,当盖玻片被粘附在载玻片下面时,翻转载玻片, 压平盖玻片,并置于位置适中。另一种方法, 将载玻片从二个苯Ⅱ中取出擦去外围的二甲苯后,立即在组织片上滴上半滴树胶。然后用小镊子挟取一盖玻片, 翻转盖片并轻轻从酒精灯火焰上通过二次,再翻转过来, 从载玻片上组织片一端轻轻放下,当盖片接触树胶时,可将盖片放下,树胶可自然扩散整个盖片, 此时注意调整适当位置。如有气泡可轻轻压盖片从一侧挤出。注意树胶的量不宜过多,防止外溢,也不可过少,防止封闭不全。 十.常用双重及多色染色剂组成与配制: (一)苏木素----伊红染色剂: 苏木素 2克 100%酒精 100ml 甘油 100ml 冰酸酸 10ml 钾明矾 3克 蒸馏水 100ml 将苏木素溶于酒精中,再加甘油和冰醋酸,把钾明矾在研钵内研成粉末,溶于蒸馏水,倾入苏木素液,用玻璃棒搅匀,混合液为淡红色,即成熟,此液可长期保存。 (二)Mager氏苏木素液: 苏木素 1克 碘酸钠 0.2克 钾明矾 50克 水合氯醛 50克 蒸馏水 1000ml 柠檬酸 1克 将苏木素及碘酸钠用蒸馏水加温溶解,呈樱 桃红色,再加入钾矾, 使溶液变为兰紫色,煮沸5