大环内酯类抗生素残留检测.pptVIP

大环内酯类抗生素残留检测;一、大环内酯类抗生素的概念及应用 二、大环内酯类抗生素的理化及药理毒理性质 三、大环内酯类抗生素的样品前处理方法 四、大环内酯类抗生素的理化检测方法 五、大环内酯类抗生素的生物监测方法;一、大环内酯类抗生素的概念及应用;二、大环内酯类抗生素的理化及药理毒理性质;;三、大环内酯类抗生素的样品前处理方法;;2、基质固相分散 ;3、固相萃取;1、高效液相色谱法（HPLC） 2、气相色谱——质谱联用法（LC—MS） 3、薄层色谱分析法 4、紫外分光光度法 5、荧光光度测定法 6、毛细管电泳一电化学发光联用分析技术（CE—ECL）;1、高效液相色谱法（HPLC）;2、气相色谱——质谱联用法（LC—MS）;;;5、荧光光度测定法;6、毛细管电泳一电化学发光联用分析技术 （CE—ECL）;大环内酯类药物作为一类重要的抗生素，其应用范围相当广泛。其微生物监测方法主要 微生物效价法和微生物抑制法。 微生物效价法是其一种经典的检测方法。但是近年来的研究发现其有较大局限性。由于生产菌种不同，不同厂家产品的组分比例也不同，因此微生物效价也就有明显的差别，要用此方法来达到监测药品质量的目的是远远不够的。;1、试样制备牛奶：取不少于500ml试样，装入清洁容器内，进行标记。肉类、水产品、动物内脏：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入高速组织捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于500g试样。装入清洁容器内，进行标记。蛋：从原始样品中，随机分出一半（不少500g），鲜蛋需去壳，进 行标记。注：制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。;2、方法提要试样经压榨得到样液，样液加到含有一定数量的嗜热脂 肪芽孢杆菌培养基中，64摄氏度培养3h~4h。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有抗生素。;3、设备和材料恒温箱（63~65摄氏度） 离心机 高速组织捣碎机 均质器 恒温水浴锅（80摄氏度） 漩涡振荡器 肉类榨汁器 克氏瓶 安瓿 可调移液器：10uL~100uL、100uL~1000uL嗜热脂肪芽孢杆菌;培养基：细菌保存及传代培养基、增菌固体培养基、检定培养基试剂：蒸馏水、溴甲酚紫、甲醇、标准物质泰勒菌素（纯度≧98%） 泰乐菌素标准储备液：100ug/ml。称取标准物质泰乐菌素10.0mg （精确至0.1mg），用甲醇溶解并定容至100ml，得到终浓度为 100ug/ml的泰乐菌素标准储备液，置2~8摄氏度冰箱中保存，可使用1个月。;泰乐菌素标准工作液：0.05ug/ml。吸取一定量的泰乐菌素标准储备液，用甲醇稀释成0.05ug/ml的泰乐菌素标准工作液置2~8摄氏度冰箱中保存，可使用1周。; 4、测定步骤肉类、水产品、动物内脏：用肉类榨汁器榨汁，取大约250ul汁液作为待测样液。蛋：取禽蛋液体至清洁容器中，均质后直接取样。牛奶：直接取样。;菌悬液制备：一般情况下，菌种的传代次数不应超过5代，否则在每次使用前确证其生化特性没有发生变异，或另需购置新的标准菌株。在确定保存的菌种生化特性没有改变后，将复活的菌种分别接种于盛有增菌固体培养基的克氏瓶中，55摄氏度培养72h镜检芽孢数达80%以上（如果达不到，可再培养数日，芽孢数量仍达不到要求，菌种可能变异，不可使用），用灭菌生理盐水洗下菌苔，使其悬浮于生理盐水中，80摄氏度水浴加热30min，2000g离心20min，弃上清液，用灭菌生理盐水重复洗涤芽孢两次。然后用灭菌生理盐水制成菌悬液，用稀释平板计数的方法或比浊法进行菌体计数以确定菌悬液的浓度，菌悬液中菌体细胞的含量应达到1.0×108CFU/ml。置2~8摄氏度冰箱保存，贮存期1个月。;检定安瓿的制备将嗜热脂肪芽孢杆菌菌悬液加入到融化后冷却至60摄氏度左右的灭菌检定培养基中，充分混匀，使培养基中嗜热脂肪芽孢杆菌的浓度达到1.0×106CFU/ml。在灭菌安瓿中加入1ml混合液，保持水平待其凝固。取制备好的检定安瓿，加入100ul0.05ug/ml泰乐菌素标准工作液，室温放置20分钟后，64摄氏度培养3h~4h，琼脂培养基颜色不变色，仍呈现紫色的安瓿为合格，达不到要求的安瓿应弃去。制备好的安瓿置2~8摄氏度冰箱可保存1周。;测定取制备好的检定安瓿，其中一个加100ul0.05ug/ml泰乐菌素标准工作液作为阳性对照，一个加入100ul阴性样品样液作为阴性对照。吸取100ul待测样液加入检定安瓿中，将安瓿放置室温，20分钟预扩散；对于蛋、鱼、肾脏样品，预扩散后，需置于80摄氏度水浴加热10分钟。预扩散后，用蒸馏水洗涤安瓿两次，洗去待测样液，去 除安瓿内剩余的水，用铝箔纸封住安瓿口。将安瓿置于培养箱中，64摄氏度培养3h~4h，直到