第六章层析技术 - 南京农业大学.ppt

第九节 气相色谱 基本原理： 相关术语： 噪声：样品进入检测器前，在实验操作条件下，记录笔所走的路径，称为基线。基线在短暂时间内的波动。 漂移：基线在较长时间内的位移。只有当噪声和漂移均很小的，仪器稳定性才好。 死时间：进样开始至出空气峰所需的时间，以t0表示； 保留时间：进样开始至出某组分峰所需的时间，称为该组分的保留时间，以tR表示；调整保留时间：扣除死时间后的保留时间，称为tR′。 相对保留值：第二组分的调整保留时间与第一组分的调整保留时间的比值。称为α21表示：α21=tR2/tR1 色谱峰的峰高，以h表示；峰高为一半处的色谱峰宽度，称为半峰宽，以W1/2表示；通过色谱峰两侧的转折点(拐点)作切线，在基线上的截距，秒为基线宽度 ，以Wb表示。 * 南京农业大学 生命科学学院 * 第九节 气相色谱 基本原理： 根据tR、tR′或α，可作定性；根据峰高h或峰面积A，可作定量测定，对称峰的面积可用下式计算：A = h×W1/2 气相色谱法具有高效能、高选择性、高灵敏度、快速和应用范围广等优点，常用作有机物的分析。 气相色谱的特点： 气体粘度小，气相与液相间的质量传递速率高，容易达到平衡。 检查气体中的组分比检定液体的组分容易。 气液色普法中固定相液体的选择范围很广，操作温度范围也很宽。 由于有灵敏的检测器，样品用量很少。 * 南京农业大学 生命科学学院 * 第九节 气相色谱 * 南京农业大学 生命科学学院 * 在进行气相色谱分析时，应选择最佳色谱条件，其主要内容如下： 色谱柱：长度、内径、质料； 固定相：固体吸收剂；担体、固定液、液担比； 检测器：种类、使用温度； 流动相：载气名称、纯度、压力、流速等； 燃 气：名称、纯度、压力、流速等； 助燃气：名称、纯度、压力； 记录仪：类型、全程毫伏、 纸速等。 第九节 气相色谱 气相色谱仪的组成： 载气：常用的气体有氢气，氮气，氦气，CO2 ，氩气等。 层析柱：仪器的重要组成部分。 支持物（担体）：作用是支持固定液，这种物质无吸附性能，惰性，即不与固定相或要分离的组分起任何反应，高温下也不变性。 固定液：没有挥发性，对要分离的组分有足够的溶解能力。 样品：一般采用ug到mg量范围，并尽可能以浓缩方式送入柱内。 * 南京农业大学 生命科学学院 * 鉴定器：是测定流出气体组分的装置，要求能迅速地反应组分的变化，有很好的稳定性，有足够的灵敏度，重复性好，而且结构简单，与组分无作用，有较宽的操作温度。 第九节 气相色谱 色谱柱 色谱柱是分离混合组分的关键部件。色谱柱由柱管和固定相组成。按照柱管的粗细与固定相的填充方法，色谱柱可分为两类： 填充柱：由φ4-6mm，长2-4m的不锈钢管或玻璃管制成 ，其中填充吸附剂(气固色谱)或涂渍固定液的担体(气液色谱)。 毛细管柱，常用φ 0.05 - 0.5mm，长几十至几百米的金属、玻璃或塑料管，将固定液直接涂在毛细管的内壁上制成。 担体 在填充柱中所用的担体，要求表面积大，颗料均匀；表面呈化学惰性，不与被分离物质反应 ；热稳定性好，有一定的机械强度。担体可分为硅藻土型担体和非硅藻土类担体（如聚四氟乙烯担体）两大类。 * 南京农业大学 生命科学学院 * 第九节 气相色谱 检测器 检测器的作用是将由色谱柱分离出来的各组分转变成电信号。常用的检测器有以下三种。 火焰离子化检测器 由色谱柱流出的有机组分，在氢火焰中燃烧裂解为自由基，反应产生离子并在300V电压的电场中，带电离子和电子被对应的电极吸引作定向运动而产生电流。电流大小与被测有机组分的含量成正比。 电子捕获检测器 含强电负性元素（O、N、Cl、S等）的化合物，能捕获电子，常以此来检测含量。其原理是：当纯载气（如氮气）进入检测器时，受β射线照射，电离生成阳离子和电子，在电极间形成约10-8A的电流。含强电负性元素的化合物进入检测器时，捕获电子而成为阴离子，与载气电离生成的阳离子碰撞形成中性分子。由于这一过程使电离电流降低，故记录器上出现倒峰。电离电流降低的数值与载气中这种组分的含量成正比。 火焰光度检测器 * 南京农业大学 生命科学学院 * 第九节 气相色谱 定性和定量方法 定性 常利用保留时间tR、调整保留时间tR′及相对保留值α21定性。可用已知纯品作对照或在样品中加纯品后看峰高的增加。对于未知范围的混合物，单纯用气相色谱定性则很困难，可与红外分光光度计或质谱仪联用来鉴定特定的组分。 定量 准确测定流出曲线的色谱峰面积是定量分析的基础，峰面积可以用峰高乘半峰宽或峰高乘平均峰宽法计算，但近年出厂的气相色谱仪均具数据处理机或色谱工作站，能自动显示和打印峰面积和峰高，在已知峰面积的情况下，常用的定量方法有：外标法，内