任务1-2-2谷氨酸生产菌-谷氨酸鉴定(纸层析).pptVIP

1.2-2谷氨酸生产菌-谷氨酸鉴定（纸层析） 一、实验目的 1. 掌握纸上层析的一般原理和方法 2. 了解氨基酸的特征性颜色反应 二、实验原理 纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。 溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示： Rf =原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离= X/Y 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。 Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 三、实验器材 （1）层析缸 （2）毛细管：5只/组。 （3）培养皿：1只/组。 （4）层析滤纸（长16cm、宽16cm的）：1张/组。 （5）直尺、铅笔：自备。 （6）电吹风：1只/组。 （7）针、白线：1套/组。 （8）小试管：4只/组 四、实验试剂 1. 展层剂和平衡液 正丁醇:冰醋酸:水=4:1:5，充分摇匀，用分液漏斗取上层液作展层剂；下层液作平衡液(弃去)。 2. 样品液 用水配成每ml含有丝氨酸、亮氨酸、脯氨酸各4mg/ml的氨基酸溶液，以及上述四种氨基酸的混合液(各4mg/ml)。 3. 茚三酮 按展层剂0.25%的比例将茚三酮加入展层剂中，使其溶解。 五、实验操作 检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。 （2）规划：取宽约16cm、高约16cm的层析滤纸一张。在纸的下端距边缘2cm处轻轻用铅笔划一条平行于底边的直线A，在直线上做4个记号，记号之间间隔2cm，这就是原点的位置。另在距左边缘1cm处画一条平行于左边缘的直线B，在B线上以A、B两线的交点为原点标明刻度（以厘米为单位），参见左图。 （3）点样：在每个圈下用铅笔记上每种氨基酸的代号(混合样可写M)，然后用毛细管吸取样品，轻轻地点到相应的氨基酸圈内，待晾干或用冷风吹干后再点第二次。前三种氨基酸各点3次，混合液点6次。将点过样的滤纸用针线卷成筒状（点样面向内），注意纸的两边不能接触，留一定缝隙。 。 （4）层析：将培养皿中放入2/3量的展层剂，迅速放置于层析缸中。把滤纸筒转移到此培养皿内，样品端向下垂直放置，切勿使展层剂浸到样品点。当溶剂前沿到达滤纸2/3处，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿。