分子生物学检验技术第5章.pptVIP

第五章 核酸的分离纯化;DNA和RNA是生物体中最重要的核酸分子，是分子生物学和分子诊断的研究对象 DNA和RNA的分离纯化是分子生物学研究及分子诊断最基础的工作;核酸分离纯化的原则: 保持核酸一级结构的完整性 尽可能提高核酸制品的纯度;第一节 核酸分离纯化的设计及原则;第一节 核酸分离纯化的设计及原则;一、材料与方法的选择;（一） 材料与方法的选择; 1.保持核酸碱基序列的完整性 2.尽量清除其它分子的污染，保证核酸纯度 3.保持核酸的完整性 尽量简化分离纯化步骤，缩短提取时间 尽量避免各种有害因素对核酸的破坏 ;二、技术路线的设计;（一）核酸的释放;; 应该清除的杂质主要包括: 1.非核酸的大分子污染物 蛋白质、多糖及脂类物质等 2.非需要的核酸分子 分离某一核酸分子时，其它核酸皆为杂质 3.加入的有机溶剂和某些金属离子;（三）核酸的浓缩、沉淀与洗涤;三、核酸的鉴定与保存;（一）核酸的鉴定; 紫外分光光度法： 核酸分子中的碱基具有共轭双键结构，可以吸收紫外线，其最大吸收波长为260nm。 ; 各种碱基的紫外吸收光谱; 荧光光度法： 核酸的荧光染料溴化乙锭嵌入碱基平面后，本身无荧光的核酸在 UV