实验七-维生素C的定量测定-2-6-二氯酚靛酚法.ppt

维生素C的定量测定-2，6-二氯酚靛酚法 一、实验目的 二、实验原理 三、器材仪器和主要试剂 四、实验操作 五、思考题 一、实验目的 从食品原料等提取维生素C、脱色 2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定、计算 二、实验原理 染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态变为无色;二介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介质中呈浅红色。 用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。 当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。 VC 还原型 脱氢VC 氧化型 2,6-二氯酚靛酚 氧化型(酸性溶液中,呈玫瑰色) 2,6-二氯酚靛酚 还原型(无色) 三、器材仪器和主要试剂 偏磷酸:2%溶液(W/V)* , 盐酸:2%溶液(W/V) 抗坏血酸标准溶液(0.2mg/ml):称取50mg(准确至0.1mg)抗坏血酸,溶于浸提剂 中并稀至250ml。现配现用。 2,6－二氯靛酚(2,6－二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml 热蒸馏水中,然后称取2,6－二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至 250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中。每次使用前,用标准抗坏血酸标定其滴定度。 标定 吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇匀,用2 ,6－二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取10ml浸提剂做空白试验。 滴定度(mg/ml)＝cv/V1－V2 s─每毫升2,6－二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数; C—抗坏血酸的浓度,mg/ml; V—吸取抗坏血酸的体积, ml; V1—滴定抗坏血酸溶液所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml; V2—滴定空白所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml。 白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。 本实验结果为:0.088 mg/ml 计算 维生素Ｃ（mg/100g）样品＝（VA-VB） SV100/WD 式中： VA：滴定样品用去2,6-二氯酚靛酚钠的平均ml数 VB：滴定空白用去2,6-二氯酚靛酚钠的ml数 S：每毫升2,6-二氯酚靛酚钠溶液相当于维生素Ｃ的mg数 V：样品提取液总毫升（定容后的ml数,50或100 ml ） D：滴定时所取的样品提取液ml数(10 ml) W：样品的重量（g） 1、为了测得准确的维生素C浓度，实验过程中应注意哪些操作步骤？为什么？ （1）在操作过程中某些步骤一定要快，避免Vc的氧化，因为Vc具有还原性，还要向样品中加入草酸溶液，保护Vc； (2)对于Vc标准溶液要现用现配，尽量精确，避免Vc氧化，避免因为标准溶液的误差造成的误差； (3) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。 (3) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢 五、思考题 1、指出本实验采用的定量测定维生素C的方法有何优缺点？ 2、简述维生素C的生理意义。