猪表皮生长因子在毕赤酵母中的表达及鉴定研究.pdfVIP

猪表皮生长因子在毕赤酵母中的表达及鉴定 杨桂香，汪洋，吴波浪。张万江，黄伟华，彭险峰 (华南农业大学兽医学院／广东省兽药研制与安全评价重点实验室，广州510642) 摘要：【研究目的】猪表皮生长因子(pEGF)具有刺激静止期猪卵母细胞的成熟以及刺 激仔猪胃肠上皮细胞成熟的功能，从而可以提高母猪繁殖率和降低断奶仔猪的应激。因此非常 有必要开发猪表皮生长因子。【方法】用人工合成的pEGF基因为模板，用PCR扩增获得 点杂交法筛选多拷贝整合转化子即基因工程茵，用N卜NTA亲和层析方法纯化目的蛋白，纯化 产物用抗His—tag的单克隆抗体进行蛋白质免疫印迹、氨基端测序鉴定、体外生物活·】生检测。 【结果】斑点杂交法筛选中信号越强的转化子，甲醇诱导表达的目的蛋白含量越高。免疫印迹 中可以观察到印迹条带。氨基端氨基酸测序发现纯化的表达产物含有2条肽链，其N一端15个 氨基酸的序列分别与天然的pEGF以及Glu—Ala—pEGF的序列相同。体外生物活性检测结果表 明。纯化的表迭产物对BALB／c3T3细胞具有显著的增殖作用。【结论】本研究获得了能高效表 达具有生物学活性的重组猪表皮生长因子的基因工程茵。 关键词：猪表皮生长因子； 毕赤酵母； 分泌表达； 生物活性 1引 言