水质 细菌总数测定作业指导书.doc

水质 细菌总数测定作业指导书 含义及执行标准 含义 细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24小时后，所生长细菌菌落的总数。 方法原理 平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。 水环境质量标准 表1-1 细菌总数地下水质量分类指标 （GB/T 14848-93） 类 别 Ⅰ类 Ⅱ类 Ⅲ类 Ⅳ类 Ⅴ类 标准值（个/mL） ≤100 ≤100 ≤100 ≤1000 ＞1000 表1-2 细菌总数生活饮用水卫生标准 （GB 5749-2006） 类 别 饮 用 水 农村小型集中式供水和分散式供水4.1 选择稀释度 稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30～300之间。 大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL，所得的菌落总数可适于计数。 2.4.2 水样的稀释方法 ①将水样用力振摇20～25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。 ②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。 2.4.3 操作方法 ①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2～3个适宜浓度的稀释水样1mL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每个水样应倾注两个平皿。 ②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。 2.4.4 菌落计数 培养之后，立即进行平皿菌落计数。如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5～10℃冰箱内，且不得超过24h。但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。 作平皿菌落计数时，可用解剖镜检查，以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数。在求同稀释度的平均数时，如果其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘以2代表全皿菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。如果由于稀释等过程中有杂菌污染，或者对照平皿显示出培养基或其他材料染有杂菌，以致平皿无法计数，则应报告“实验事故”。 对那些看来相似，距离相近但是却不相触的菌落，只要它们之间的距离不小于最小菌落的直径，便应一一予以计数。那些紧密接触而外观（例如形态或颜色）相异的菌落，也应该一一予以计数。 2.4.5 计算 细菌总数是以每个平皿菌落的总数或平均数（例如同一稀释度两个重复平皿的平均数）乘以稀释倍数而得来的。各种不同情况的计算方法如下： ①首先选择平均菌落在30～300之间者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告（见表3例1）。 ②若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300之间，则应该按二者之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则报告其中较小的数值（见表3例2、例3）。 ③若所有的稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释倍数最大的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表3例4）。 ④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释倍数最小的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表3例5）。 ⑤若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘稀释倍数报告（见表3例6）。 表3 稀释度选择及菌落总数报告方式 例次 不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度菌落数之比 菌落总数 （个/ml） 报告方式 （个/ml） 备注 10-1 10-2 10-3 1 1365 164 20 — 16400 16000或1.6×104 两位以后的数字采取四舍六入五单双的原则取舍 2 2760 295 46 1.6 37750 38000或3.8×104 3 2890 271 60 2.2 27100 27000或2.7×104 4 无法计数 1650 513 — 513000 510000或5.1×105 5 27 11 5 — 270 270或2.7×102 6 无法计数 305 12 — 30500 31000或3.1×104 质量控制要求 对照控制 采用无菌水作全