Alexa Fluor 488 抗体标记试剂盒.pdfVIP

联科生物技术有限公司 杭州市文二路 207 号文欣大厦（310012 ） 免费电话：8008571184 网址： 邮箱：service@ 物流中心：0571 北京：0010上海：021 广州：020 杭州：0571 苏州：0512 南京：025 厦门：0592-5597797 Alexa Fluor 488 抗体标记试剂盒 试剂盒组分： A ．AF488 活性染料 5 瓶 B ．碳酸氢钠 ～84mg C ．纯化树脂 ～10ml D ．空柱 5 个 E ．收集管 5 个 注意：纯化的蛋白 buffer 中不得含有铵离子或伯铵，因为它们会与蛋白质竞争结合活性染料。不纯的抗 体或者含 BSA 或明胶的抗体标记效果不好。低浓度的叠氮钠（小于 3mM ）或thimerosal （小于1mM） 不影响偶联效果。 一、实验步骤： 1．标记蛋白 1．1 将 1ml 去离子水加入 B 组分瓶中，配成 1M 的碳酸氢钠溶液。振荡或吹打至完全溶解。该溶液 pH 约 8.3，2～6 度保存可用 2 星期； 1．2 若抗体是溶液，将抗体稀释至 1mg/ml，再加入 1/10 体积的上述碳酸氢钠溶液；若抗体是冻干粉， 将 1M 碳酸氢钠溶液用 10 倍去离子水稀释成 0.1M 后，用其将抗体溶成 1mg/ml 的溶液； 1．3 将上一步的蛋白溶液 100μl 加入活性染料瓶中。盖上盖子轻轻翻动一会儿至染料完全溶解。剧烈 震动可能会导致蛋白降解（可将瓶上的标签撕掉后观察溶解情况）； 1．4 室温孵育溶液 1 小时，每 10～15min 轻轻翻动瓶子使两种反应物混合均匀（孵育期间进行2.1~2.4 步准备树脂柱，这个过程需要大约 15min）。 2 ．纯化标记上的蛋白 2 ．1 将树脂柱放入一个 13×100mm 的玻璃管中； 2 ．2 搅动纯化树脂（组分 C ），加入 1.0ml 悬浮液至空柱中静置； 2 ．3 继续加入树脂至床体积为～1.5ml； 2 ．4 将树脂柱放入一个收集管中，用垂直转子 1100g 离心 3min，rpm 与相对离心力 g 的换算公式如下： -5 2 相对离心力 g=(1.12 ×10 )(rpm) (半径 cm) ；离心后静置待缓冲液全部流出，弃去缓冲液，保留收集管 （若 没有垂直转子，角转子也可）； 2 ．5 将 1.4 步的反应液 100μl 逐滴加入树脂柱的中心部位，使溶液被吸入胶床中； 2 ．6 将树脂柱放入空的收集管中，1100g 离心 5min； 2 ．7 离心后，收集管内是标记好的蛋白，溶在 100μlPBS 中，pH7.2 ，包括2mM 的叠氮钠。未结合的染 料保留在柱中，弃去树脂柱； 3 ．计算标记比例 3 ．1 用 PBS 稀释少量纯化过的偶联蛋白，在比色皿中测定 280nm 和 494nm 的光吸收； 3 ．2 计算样品中的蛋白浓度： 蛋白浓度=(A280-(A494 ×0.11)) ×稀释倍数/203000 3 ．3 计算标记比例： 流式细胞术 ELISA试剂盒 WB抗体及辅助试剂 免疫组化 重组细胞因子（蛋白） 荧光染料 联科生物技术有限公司 杭州市文二路 207 号文欣大厦（310012 ） 免费电话：8008571184 网址： 邮箱：service@ 物流中心：0571 北京：0010上海：021 广州：020 杭州：0571 苏州：0512 南京：025 厦门：0592-5597797 每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A494 ×稀释倍数/(71000 ×蛋白浓度) 对于 IgG 抗体来说，这个值在 4～9 之间是最适的 3 ．4 偶联物的贮存： 标记好的蛋白贮存于 2～6 度，避光。若纯化的蛋白偶联物浓度小于 1mg/ml，加入BSA 或其他稳定蛋白