液相色谱法的条件试验.ppt

液相色谱法的条件试验 孟照明 20 目录 实验目的 实验原理 仪器与试剂 实验步骤 仪器清洗（结束工作） 一、实验目的 掌握色谱分析的原理 掌握高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 掌握SY-8100高效液相色谱仪的基本操作步骤 掌握HPLC条件试验的方法以及分离条件的确定 二、实验原理 本次实验采用ODS-C18色谱柱，以甲醇+水混合液为流动相，根据混合物中萘、联苯和菲在固定相与流动相间分配性质的不同，进行分离。不同比例的甲醇+水混合液为流动相，流动相的极性发生改变，因此混合液的分离条件也发生了改变，选择能将混合液中各组分能充分分离并且相对分析时间短的条件，综合确定HPLC法分析萘、联苯、菲的分析条件，完成对混合液的分析。 检测器采用紫外分光（UV）检测器，检测波长为254nm。 三、仪器与试剂 仪器： SY-8100高效液相色谱仪 1台 KQ-50B超声波清洗器 1台 AP-01P真空泵 1台 过滤装置 1套 微量注射器 50μL 1支 容量瓶 50mL 7只 药品： 萘（G.R.）、联苯（G.R.）、菲（G.R.）、甲醇（G.R.）、二次蒸馏水 四、实验步骤 流动相的准备 1、流动相的过滤 安装抽滤装置，选用有机相过滤膜，过滤试剂甲醇；选用无机相过滤膜，过滤二次蒸馏水。 2、流动相的脱气 将盛有过滤好甲醇、二次蒸馏水的试剂瓶分别放于超声波清洗器中，进行脱气处理。 仪器的准备 1、更换流动相 将A泵的输液管放入处理好的甲醇试剂瓶中；B泵的输液管放入处理好的二次蒸馏水试剂瓶中。 2、分别排除A、B两个泵输液管中的气泡 3、开启高压泵A、高压泵B、UV检测器、混合器的电源，打开工作站 分析步骤 1、分别设置两个高压泵的流量，使总流量为F＝1.00mL/min，分别启动两泵 2、待基线稳定后，完成标样的分析，记录分析所获得的各组分的保留时间、理论塔板数、分离度。数据填表 3、选择最佳流动相配比，调整A、B两泵的流量。待基线稳定后吸取标样，完成分析后建立组分表，再完成试样的分析，测得试样中萘、联苯和菲的含量，完成实验 2013年11月19日第四组实验数据 　 保留时间 分离度 理论塔板 次数 萘 联苯 菲 萘 联苯 菲 萘 联苯 菲 0 4.31 4.55 5.16 0 1.41 3.38 15454 15863 16323 0.02 4.43 4.72 5.42 0 1.67 3.61 15644 15227 15223 0.04 4.75 5.16 5.99 0 2.19 3.89 15442 15275 15047 0.06 4.92 5.44 6.43 0 2.44 4.15 13888 13132 13915 0.08 5.3 6 7.21 0 3.01 4.58 13243 13090 14350 0.10 5.61 6.51 7.99 0 3.6 4.98 13199 12896 13532 0.12 6.26 7.51 9.34 0 4.45 5.47 13196 13577 14379 结论：根据上述数据和折线图分析确定最适宜的为第四组数据。 根据最适宜条件测出以下数据： 保留时间 分离度 理论塔板 组分标样 5.16 5.74 6.76 0 2.85 4.41 16323 15535 16635 峰高 峰面积 结果 萘 联苯 菲 萘 联苯 菲 萘 联苯 菲 未知试样 171451 486350 202391 1098531 3497776 163071 0.0353 0.0378 0.0101 五、仪器的清理（结束工作） 更换流动相 将流动相重新更换为处理过的甲醇，以利于色谱柱的保护。 清洗“进样阀” 用适量的甲醇清洗进样器、进样阀，以避免样品组分的残留。 谢谢