临床微生物学和微生物学检验-中国医科大学网络教.pptVIP

第二章细菌感染实验诊断 疾病的种类不断发生变迁，传染病如 鼠疫等已明显减少，相反，由条件致病菌 引起的内源性感染却明显增多。同时，新 的病原菌不断出现，原有的病原菌因变异、 耐药等又重新流行。 　 目前，临床遇到主要是条件致病菌， 引起的感染。正常菌群与病原菌的致病 性是相对的，因此，既不要轻易认为分 离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易 认为所发现的细菌就是该感染的病原菌， 必须结合临床进行进一步的诊断。 第一节 临床感染性疾病 实验诊断要求 一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴 定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的，要进行临 床标本的直接药物敏感试验。 3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为目的,应 该做细致的鉴定。 二、诊断试验的选择 1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验，达 到目的即可。 3.综合考虑试验的敏感性和特异性。 敏感性=阳性结果数/感染病人数，越高假阴性就越少。 特异性=阴性结果数/未感染病人数，越高假阳性就越少。 三、常用诊断流程 2.表解法： 将各种细菌及其多种特性列成矩阵表 格，使相互的区别点十分明显，便于 分析比较。此法对于相互区别比较复 杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属。 3.数字编码鉴定法 将所得生化反应模式转化成数学模式，可把细菌生化反应结果转化成数字，经检索手册又可将转化成细菌名称。与电脑分析软件配套，形成了半自动或全自动细菌分析系统。 第二节 临床标本的采集 与处理 一、标本采集的一般原则 1.病程早期、急性期或症状典型时， 使用抗生素前。 2.无菌采集 应无污染，严格进行无 菌操作。 3.根据目的菌的特性用不同的方法采集 适量标本，采集量不应过少。 4.注意在不同病程采集不同部位标本。 5.采集标本时要防止传播和自身感染。 二、标本的处理 1.标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。 脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培 养的标本保存时间不应超过24h。对环 境敏感的细菌应保温并立即送检。 2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全 防护。切勿污染环境。对于烈性传染病 标本运送时更要由专人运送，严格按规 定包装。 3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管 内运送，有时可直接用抽取标本的注射 器运送。 第三节 细菌形态学检查 一、显 微 镜 1.普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌 均能清 楚看到。 2.暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋 体的形态及运动观察。 3.相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态 及某些内部结构。 4.荧光显微镜可看到发射荧光的细菌。还应用 于免疫荧光技术中。 5.电子显微镜有透射电子显微镜和扫描电子显 微镜。前者适于观察细菌内部超微结构，后 者适于对细菌表面结构及附件观察。 二、不染色细菌标本检查 1.主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。可对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱菌。 2.螺旋体由于不易着色并有形态特征，故多用不染色标本作暗视野显微镜检查。 三、细菌染色标本的检查 细菌标本经染色后，除能清楚看 到细菌的形态、大小、排列方式外， 还可根据染色反应将细菌进行分类。 (一)常用染料 分为碱性和酸性两大类。此外，还有复合染料。 1．碱性染料 电离后显色离子带正电荷， 易与带负电荷的被染物结合。由于细菌 均带负电荷，易与染料结合而着色。常 用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。 2．酸性染料 电离后显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆，而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料有伊红、刚果红等。 3．复合染料(中性染料)及荧光染料 复合染料是碱性染料和酸性染料的 复合物，如瑞氏染料(伊红美蓝)、 姬姆萨染料(伊红天青)等；荧光染 料如荧光标记的抗体，荧光素常用 异硫氢基荧光素。这些染色常用于 某些特殊的染色技术中。 （二）常用的染色方法 在细菌感染标本的检查中，临床上常 用的染色方法有革兰染色、抗酸染色 和荧光染色。 1．革兰染色 最经典、最常用的染色方法。在分离 培养前都要进行革兰染色、镜检。通 过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G- 菌两大类，可初步识别细菌，有助于 进一步鉴定。 结合细菌特殊结构及排列方式，对病 原菌可进行鉴定，其结果为临床早期诊断 及治疗提供了依据。 革兰染色可