干扰八聚体转录结合因子4A对人牙髓细胞增殖与多向分化能力的影响.pdfVIP

672· ．牙体牙髓病学研究． 干扰八聚体转录结合因子4A对人牙髓细胞 增殖与多向分化能力的影响 伍丽静刘路陈丽虹 韦曦 factor 4A，Oct4A)在 【摘要】 目的研究八聚体转录结合因子4A(octamer—bindingtranscription dental 人牙髓细胞(humanpulpcells，DPC)的表达及对细胞增殖、成牙本质向和成脂向分化能力的影 响。方法实时荧光定量PCR(reahimequantitativePCR，RT—qPCR)技术检测健康人DPC中Oct4A的 nmol／L 表达；合成特异性针对Oct4A的siRNA(Oct4A干扰组)，50 siRNA经脂质体Lipofectamine“ RNAiMAX转染DPC24、48、72、96和120h，以无义序列．siRNA转染的DPC作为阴性对照，细胞计数 试剂盒法检测细胞增殖情况、RT．qPCR检测Oct4A的mRNA水平以选取最佳转染时间；茜素红染色 14 14 检测成牙本质诱导DPCd后矿化结节形成情况，油红O染色检测成脂诱导DPCd后脂滴形成 情况，RT—qPCR技术检测成牙本质向分化标志物牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphopr0Iein，DSPP)和 成脂向分化标志物脂蛋白脂酶(1ipoproteinlipase，LPL)的mRNA表达变化；蛋白质印迹法检测DSPP 和LPL的表达。结果Oct4A在第3代DPC中表达最高(2．10±0．10)，为第1代DPC的2．10倍(与 72h，干扰效率达峰值 第1、7代相比P=0．000)，之后随细胞传代表达下降；Oct4A．siRNA转染DPC (69．7％)；与正常细胞组及阴性对照组相比Oct4A干扰组细胞增殖能力显著下降，矿化结节和脂滴 形成显著减少(P=0．000)，分化标志物DSPP和LPL表达量显著下降(P=0．000)。结论瞬时干扰 牙髓细胞中Oct4A的表达可以降低细胞增殖和成牙本质向、成脂向分化能力。 【关键词】 细胞增殖；细胞分化；牙髓细胞；八聚体转录结合因子4A Interferenceof factor4Aanditseffectonthe and octamer．bindingtranscription proliferation differentiationofhumandental cells WU Xi． multiple pulp Li-jing，HULu．CHENLi—hong．WEI and School of DentistryEndodontics，GuanghuaofStomatology，Hospitalof DepartmentOperative Yat—sen Provincial KeyLaboratoryofStomatology，Guangzhou Stomatology．SunUniversityGuangdong 510055．China edta author：形町Xi，Emaif：weixi@mailcn，Tef：0086—20 Corresponding sys