榨菜细胞质雄性不育系及其保持系atpA基因组结构差异研究.pdfVIP

榨菜细胞质雄性不育系及其保持系atpA基因组 结构差异 张明方杨景华喻景权 (浙江大学农业与生物技术学院，杭州，310029) 摘要：以榨菜细胞质雄性不育系及其保持系基因组总DNA为模板，通过特异引物PCR方法克隆 了榨菜d舰I基因，基因大小为1524bp，推定编码507个氨基酸，进化分析表明atpA基因非常保守： 进一步分析发现了不育系及其保持系坤州基因的5『UIR区存在差异．这为能量代谢相关基因与细胞质 雄性不育性产生的关系提供了分子证据。 关键词：榨菜； 细胞质雄性不育；硒习b基因组结构 √ √ 弋v 十字花科作物存在着明显的杂种优势，目前杂种一代的生产主要是利用自交不亲和性和雄性 不育性途径。雄性不育既可以省去人工去雄，又可以获得100％杂种，在十字花科作物杂种优势利 用中有着重要应用价值。迄今为止，许多重要的经济作物，白菜【Il≈、甘蓝【3】、榨菜【4】、甘蓝型油 菜【51等，都选育出综合性状良好的雄性不育系。细胞质雄性不育由于其可以获得100％不育度和不 育率的材料，因此，在十字花科作物优势育种利用中有着更广阔的前景。榨菜是中国的特产蔬菜， 在浙江和四川等地有着广泛的栽培。陈竹君等HI通过远缘杂交和回交的方法选育了综合经济性状 优良的榨菜细胞质雄性不育系(CMS系)，并开始应用于生产。 众多学者认为，植物细胞质雄性不育性是由线粒体基因组控制，具有典型的母性遗传的特点， 因此在不育系的后代中不存在育性分离的现象，而育性的恢复是由核基因组控制，并且不同的细 以及Sabartlo]等研究的证据表明，细胞质雄性不育的产生与植物能量代谢相关，由于植物呼吸代 谢及能量产生途径中呼吸复合体的突变，导致花器发育过程中能量供应不足，从而造成小孢子发 育不正常。产生雄性不育性。同时。国内也有学着报道在不育系和保持系之间线粒体呼吸代谢相 关酶活性以及ATP的产生存在着差异u“。。因此，对于植物线粒体中能量产生途径中编码呼吸复 合体基因的研究，有助于进一步阐明细胞质雄性不育性产生的分子机理。我们以榨菜细胞质不育 系及其保持系为材料，发现了编码呼吸及能量产生中的ATP酶复合体a亚基基因atpA的基因组 结构的差异，进一步为能量代谢与细胞质雄性不育性相关提供分子证据。 1材料方法 1．1材料 以综合经济性状优良的榨菜细胞质雄性不育系(CMS系)及其保持系(M系)的田间幼嫩叶 片为材料，采用改良CTAB法提取材料中基因组总DNA． 1．2 PCR扩增及产物克隆 rain 预变性3min后，94‘C变性30SeC，50。C退火45 30 SeC，720延伸1SeC，35个循环后72。C延 伸10 min。PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。 通过PCR初步筛选阳性克隆，酶切鉴定筛选到阳性克隆的重组质粒。 1．3序列测定及分析 重组质粒经上海博亚生物公司测序，得到克隆基因的基因组序列，通过Genebank数据库，对 所测序列进行分析。 2结果分析 2．1 at：pA基因的克隆 增到的5’和3’端片断分别克隆到pBS-T载体上，阳性克隆用于测序，并将两端序列拼接。 图1atpA基因5’端克隆 圈2at肼基因3’克隆 (1，2：CMS系：3，4：MF系) Fig．1 5’cloningofatpAgene Fig．z 3’cloningofa中Agene (1，2：CMSline；34：M linc) 249 m…c●】Un… Raph…．-．tⅢ● m…i—P■ m…i…～ 1i… Arabidopsi帅h 0w¨uv■ Glv……x H●1i●nthuma胁uul m