家兔胚胎克隆技术研究.pdfVIP

一一rpm**115zk4**0R**# 等 (1993),Lindemann等 (1995)、李新生等 (1999)、陈强等 (2000)、张敏红等的报道的结果相一 致，这都说明添加烟酸铬制剂后，猪体合成蛋白质能力有所增强，从而提高了氮的吸收和利用率，使氮 的代谢产物明显减少，这就有利于蛋白质的合成和沉积，表现为肌肉量的增加，这或许是血清总蛋白含 量升高的原因。添加烟酸铬制剂既显示有降低血清的甘油三酷、胆固醇的作用，同时在一定程度上又能 提高高密度脂蛋白胆固醉含量，这说明添加烟酸铬制剂可改善机体脂类代谢，这可能是与铬能影响脂肪 代谢相关酶的活性有关，还有待进一步研究。 至于报道补铬效果不理想，可能与铬作用的时间性、生长阶段、饲粮营养水平及环境因素的影响有 关。 第一作者简介 黄志坚，男，1963年4月出生，1985年毕业于农学院，硕士。现工作于福建农林 大学动物科学院，副教授。主持了福建省自然科学墓金项目:孕牛细胞免疫功能的探讨和省教育厅:有 机硒、有机铬在动物生产中的应用研究等科研项目，参加了福建省科委牛胚胎移植和胚胎冷冻技术研 究，并获1990年省科技进步三等奖 (名列第三名)。联系地址:福建福州福建农林大学动物科学院;邮 编:350002;电话:0591 家兔胚胎克隆技术研究 ‘ 常万存 ‘韩建永，马世援，张 蓉 ‘陈乃清2 NoboruFujihara3王庆国’刘文浩1 (农‘业部动植物遗传改良生物技术重点开放实验室 山东省农科院生物技术研究 中心，济南 250100;2武汉大学生命科学学院生物科学系，武汉 430072; DepartmentofAnimalScience,CollegeofAgriculture,KyushuUniversity,Japan) 摘 要 本研究以家兔16.32细胞期胚胎卵裂球为核供体，显微注射到去核卵毋细胞卵 周隙中，共制作完成229枚重组胚，2次电触合后触合率达到76.8%.重组胚与兔胚胎成纤维 细胞共同培养，卵裂率为65.7% (23/35)，桑众率达到22.9% (8/35)，均显著高于 (P 0.01)徽滴直接培养结果 (43.3%,13/30;16.7%,5/30)。在9只同期发情的受体毋兔翰卵 管中手术移植111枚重组胚，2只妊振，其中1只完成足月胚胎发育产出克隆仔兔2只。 关扭词 细胞核移植 电触合 胚胎生物技术 兔 哺乳动物细胞核移植 (动物克隆)技术是近年来国内外研究的热点项目。1997年Wilmut等人报 道了来自乳腺上皮的第一例体细胞克隆绵羊，引起轰动效应。体细胞克隆牛 (Kato,1998)、克隆山 羊 (王玉阁等，1999)先后诞生。无论用哪种类型的细胞做核供体，Illmensee等 (1981)在哺乳动 物 (小鼠)上首创的 “卵母细胞去核一显微注射一重组胚融合一移植”这一基本程序，一直是动物 克隆研究的通用程式。目前存在的主要问题是重组胚的发育率和总体成功率有待提高。本研究用胚 胎卵裂球做核供体，探索了家兔细胞核移植的技术方法，目的是为哺乳动物克隆技术的进一步研究 .本研究由山东省优秀中青年科学家科研奖励基金 (9826)和山东省引进外国专家项目(9900074)提供资助。常万存为联系作者。 409 盛 应2002一 提供科学依据。 材料与方法 1.1胚胎和卯母细胞的采集 比利时、新西兰白和青紫兰家兔共152只，颈部皮下注射PMSG100IU/ 只，72h后注射hCG100IU/只，13-15h后经外科手术在输卵管内冲取卵母细胞。供胚兔在注射hGG 同时与公兔交配，46-50h采集16细胞胚，60h采集32细胞胚。也可手术摘取超排处理3d的母兔卵 巢，在BO液中用手术刀片切割卵巢卵泡并冲洗，捡出卵母细胞。冲卵液为添加5% (V/V)胎牛血清 (FCS)的杜氏磷酸缓冲盐 (DPBS)溶液。 1.2 卵母细胞的处理 用0.3%透明质酸酶的DPBS液391v孵育10min，然后用细管反复吹吸除去颗 粒细胞，再用3mg/r