成年奶山羊黄体中弥散性神经内分泌细胞鉴定p226231.pdf

蒙古绵羊发育过程中卵巢内卵母细胞凋亡的研究 张洪波曹贵方火焱王秀梅唐博 (内蒙古农业大学动物组织胚胎学与发育生物学研究室呼和浩特市010018) 本实验运用组织学的常规方法、免疫组织化学和原位杂交等方法对蒙古绵羊卵巢发生 中组织结构的变化和凋亡调控基因Bcl．2、Bax的表达规律进行了研究。发现：60、67、 83、96两组组内不同日龄Bax蛋白表达差异不显著(pO．05)，其他日龄之间的表达除75 异均极显著(po．叭)。53日龄Bcl一2mRNA的表达阳性率为最高，60与67问比较差异不 显著，75日龄的表达降低，与53、60、67日龄的表达相比差异极显著，112日龄的表达为 最低，且与其他日龄的表达相比差异均极显著。 在实验检测的53一112日龄表达中，Bcl．2蛋白和mRNA的表达规律是一致的。在蒙 古绵羊胚胎发育过程中，卵巢内Bcl-2和Bax共同参与了凋亡的调解作用。 关键词：蒙古绵羊卵母细胞凋亡 成年奶山羊黄体中弥散性神经内分泌细胞鉴定 陈树林卿素珠范光丽赵慧英蒋田园张艳林磊 (西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100) 摘要：为了研究成年奶山羊卵巢黄体组织中是否有神经内分泌细胞存在，本实验采用免疫 组化链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶法对12一18月龄奶山羊卵巢黄体进行了研究，并对其 分泌细胞作了相应的分析鉴定．结果显示：黄体组织中各区均舍有催产素、神经元特异性烯 醇化酶．s-100蛋白．突触素和5一羟色胺样免疫反应阳性细胞．这些细胞散在或成团分布， 多呈圆形．卵圆形和三角形，一些细胞具有明显的突起，细胞棱不着色．根据免疫反应复合 物呈色的程度不同可分为强阳性、中等阳性，弱阳性三种．鉴于神经元特异性烯醇化酶、s-lOO 蛋白、突触素和5羟色胺是弥散性神经内分泌系统广谱的、共同的细胞标记物，可以推论： 12—18月龄奶山羊卵巢黄体中存在弥散性神经内分泌细胞。 关键词：弥散性神经内分泌系统黄体链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶法奶山羊 Pearse等…y-1977年提出了“弥散性神经内分泌系统(disDerSedordiffuse neuroendocrine 系统，DNES把神经系统和内分泌系统结合起来，共同调节和控制机体生命活动中的动态 平衡及生理过程。DNES概念的提出使内分泌学内容扩展到更广阔的领域，使内分泌系统 的概念扩大为两部分：即DNES和非弥散性神经内分泌系统。李丕鹏…、余锐萍…等分 别在蛇脾腺和兔圆小囊淋巴组织中鉴定出了神经内分泌细胞。卿素球等…发现山芊黄体 分泌功能活跃的卵巢，其内分泌组织细胞的性质是属DNES还是属非弥散性神经内分泌 系统?是否含有神经内分泌细胞?尚未见明确界定。本实验采用OT单克隆抗体和DNES 』’+谱的、共同的细胞标记物神经元特异性烯醇化酶(neuronenolase，NSE)、S-100 specific 蛋白(S-100 四种单克隆抗体对黄体进行了免疫组化链霉素抗生物素蛋白～过氧化物酶法(Streptaridin 为生殖内分泌系统与神经系统之间的相互联系提供直接的形态学证据，也为生殖内分泌机 理的研究提供理论依据。 1材料和方法 1，1材料 12—18月龄健康奶山羊12只，临床健康，体重35-45kg。颈动脉放血致死， 迅速割下头部，通过颈动脉灌注37*(2生理盐水来冲净血液，后灌注CC的4％多聚甲醛磷 酸缓冲液，开颅取脑，切取下丘脑，浸入上述固定液中后固定12h。致死羊后快速取出卵 巢，入4％多聚甲醛磷酸缓冲液固定10一12个小时。材料荐经70％、80％、95％、无水 乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，连续切片，片厚6岫，卵巢切片分为二套。一套用于 免疫组织化学SP法染色，一套用作阴性对照实验{丘脑切片进行免疫组化sP法染色，用 作阳性对照实验。 1．2方法免疫组化SP法染色：抗兔及抗鼠链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶免疫组化超 敏sP试剂盒、鼠抗SYP单克隆抗体、兔抗5一HT单克隆抗体、兔抗S-100蛋白单克隆抗 体、兔抗NES单克隆抗体(福州迈新生物技术开发公司)；OT单克隆抗体(第四军医大学 神经科学研究所制)；葡萄糖氧化酶和四盐酸3，3’～二氨基联苯胺(DAB)(Sigraa公司 进El、华美生物工程公司分装)。石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(PH7．4)|冲洗3次，每