气相色谱定量分析中内标法、外标法的比较及选择研究.pdfVIP

中国粮油学会第五届学术年会论文选集 283 气相色谱定量分析中内标法、外标法的比较及选择 白云霞1朱旭东2韩笑2 (朝阳市粮油监督检测站1) (辽宁省粮油检验监测所2) 摘要 内标法与外标法都是定量的一种方法，各有优缺点，要根据不同的分析和要求来选择合适的 方法。应用外标法能够满足要求，首选还是外标法，因内标法前处理比较复杂，花费的时问较长。对于精密 度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想等条件下，用内标法还是必要的。无论 应用哪种方法，方法的验证和确认都是很重要的，只要是按照程序经过验证和确认的方法，都有其应用的空 间。 关键词定量分析 内标法外标法 比较和选择 定量分析的任务是求出混合样品中各组分的百分含量。色谱定量的依据是：组分的重量或在载气中的 浓度与检测器的响应信号成正比。目前常用的定量方法主要有面积归一化法、内标法和外标法三种，其中 归一化法一般只适用于FID，内标法和外标法较常用。 1 内标法 内标法是一种常用的定量方法。操作步骤是先准确称量被测组分和内标物，混合后测定它们的相对校 正因子。然后准确称量样品，加入已知量内标物后进样，根据被测组分和内标物的峰面积比和内标物的质 量计算组分含量(见下式)。 Wi=fmWs a^i：=ifi岷石Ai 式中wi为被测组分i的百分含量；W8为内标物在混合物中的百分含量；fm为质量相对校正因子；Ai为 被测组分峰面积；气为内标物峰面积。一般选内标物为基准，则‘=l，因此fm=f／f．=fi。． 内标法是一种间接、相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物来校正和消 除操作条件对分析结果产生的影响，提高分析结果的准确度。采用内标法定量时，内标物的选择是一项十 分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样 品中去，它应当和被测样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在 溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被测物质的一个同系物。当然，在色谱分析条件下，内标 物必须能与样品中各组分充分分离。需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化合物在一个 复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化合物作内标物，来 测定化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。 内标法的关键是选择适当的内标物，选择内标物的要求有：(1)内标物必须是样品中原来没有的纯物质 (内标物纯度要高)；(2)它必须完全溶于试样中，并与试样中各组分的色谱峰能完全分离；(内标物与样品相 溶且分离，内标物和样品组分之间不发生反应)；(3)内标物的加入量应与待测组分含量相近；(4)保留时间应 与待测组分相近且能完全分开，色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰的位置相近，或在几个被测组分色谱 峰中间。 配制待测成分不同浓度的标准溶液，取相同体积的不同浓度的标准溶液，分别加入等量的内标物，混和 后进样分析，测得～和As，以彬As对标准溶液浓度作图，即得到一条内标标准曲线(见图1)。 284 中国粮油学会第五届学术年会论文选集 图1内标法标准曲线 分析时将已知质量的内标物加到已知质量的样品中，对此混合物进行色谱分析，测出组分与内标物的 峰面积比然后从内标标准曲线上查出待测组分的含量。在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与 制作标准曲线时所用的条件一致，因此，在制作标准曲线时，不仅要注明色谱条件(如固定相、柱温、载气流 速等)，还应注明进样体积和内标物浓度。 对于一个比较成熟的方法来说影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素，色谱方面的问题发生的 可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些， 但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在， 比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。进样量应足够小并 保持不变，这样才不致于造成检测器饱和。由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品