水稻生防菌株多黏类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白在大肠杆菌中的高效表达研究.pdfVIP

水稻生防菌株多黏类芽孢杆菌WYll0 抗菌蛋自在大肠杆菌中的高效表达 姚乌兰2张旭晨3王云山4宋未1· (1．首都师范大学生命科学学院，北京100037； 2．河北大学生命科学学院，保定071002； 3．中国科学院遗传与发育生物学研究所，北京 100101； 4．中国科学院过程工程研究所，北京100080) 摘要：在多黏类芽孢杆菌wYll0产生的对稻瘟病菌具拮抗活性的抗茵蛋白编码 基因(1／cP)克隆测序的基础上，为构建融合蛋白表达栽体和获得与天然蛋白质序列完 全一致的目的蛋白，以含有如P基因的重组质粒DNA为模板。设计引物时加入两端酶 切位点及肠激酶裂解位点，通过PCR扩增引入目的基因中，测序结果表明接头和读框 正确。对目的基因进行双酶切后与谷胱甘肽s一转移酶(GST)融合蛋白表达栽体 诱导表达，超声破碎菌体。收获细胞总裂解物；SDS—PAGE分析表明，融合蛋白获得 高效表达，分子量约为50kD，表达量约占茵体总蛋白的30％。采用谷胱甘肽亲和层析 拄纯化GST融合蛋白，经肠激酶特