曲马多对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞凋亡的影响.docVIP

精品论文 参考文献 曲马多对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞凋亡的影响 张凤爱 解军莹 彭凤芹 　　[摘 要]目的　了解镇痛药曲马多对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法　体外培养人乳腺癌MCF-7细胞，实验组在RPMI-1640培养液中加入不同浓度曲马多（0.01,0.1,1,10,100mu;mol?L-1），对照组RPMI-1640培养液中不加曲马多，分别孵育48小时后，采用MTT比色法检测乳腺癌细胞增殖活性，采用流式细胞技术检测曲马多对乳腺癌细胞周期的影响，用Hoechst33258染色方法分析鉴定曲马多对乳腺癌细胞凋亡的影响。结果 曲马多浓度ge;1mu;mol?L-1时，细胞增殖活性较对照组显著下降（P＜0.05）；随着曲马多浓度增加，G1期细胞比例逐渐增高，S期细胞比例逐渐降低。用Hoechst33258方法染色后在表面荧光显微镜下发现实验组部分乳腺癌细胞发生凋亡，当曲马多浓度ge;10mu;mol?L-1时，荧光显微镜下一个视野内凋亡细胞占总细胞数的比例较对照组显著增加（P＜0.05）。结论　曲马多在临床常用剂量范围内对乳腺癌细胞株乳腺癌细胞增殖和凋亡无明显影响，当浓度ge;1mu;mol?L-1时可以抑制人乳腺癌细胞株乳腺癌细胞增殖，主要将细胞周期阻滞在G1期，当曲马多浓度ge;10mu;mol?L-1时可引起乳腺癌细胞凋亡。 　　[关键词]曲马多 细胞增殖 细胞凋亡 　　DOI:10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2014.24.050 　　作者单位：张凤爱，解军莹，261000，山东青州市，青州市人民医院； 　　彭凤芹，262506，山东青州市，青州市邵庄卫生院。 　　肿瘤外科手术是实体瘤患者的主要治疗方式。在围手术期，许多因素可能对患者循环中肿瘤细胞产生影响，从而增加肿瘤患者术后转移与复发的几率[1]。镇痛类药物是肿瘤患者围术期镇痛必不可少的药物之一，这类药物同样可能通过各种机制而影响肿瘤细胞的生长、增殖及转移。但迄今为止，镇痛药物对肿瘤细胞生物学行为的影响尚无一致的结论：如 Shavit等[2]研究发现，阿片类药物能通过降低机体的细胞免疫反应从而促进肿瘤细胞生长，而更多的学者认为阿片类药物能抑制肿瘤细胞增殖[3]。曲马多是一种非吗啡类强效镇痛药。主要作用于中枢神经系统与疼痛相关的特异受体。由于镇痛作用强、维持时间长而广泛应用于各类手术术中及术后镇痛，但曲马多对肿瘤细胞生物学行为的影响尚未见报道。本研究主要观察不同浓度曲马多对体外培养乳腺癌细胞株乳腺癌细胞增殖活性、细胞周期及细胞凋亡的影响，以了解曲马多用于恶性肿瘤患者围术期镇痛及早中期癌痛治疗的安全性。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料　RPMI-1640培养基（GiBCo公司），新生小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），PBS（北京天根生物有限公司），胰蛋白酶（中南大学细胞中心），MTT（Sigma公司），DMSO（Sigma公司），Hoechst33258（Sigma公司），PI（Sigma公司），双蒸水（中南大学湘雅医院神经内科实验室），无水乙醇（天津市大茂化学试剂厂）曲马多（宜昌人福药业有限责任公司，080903），倒置相差显微镜（德国Zeiss Axiovert 200），CO2培养箱（THERMO），酶标仪（THERMO）流式细胞仪（美国Coulter公司）人乳腺细胞(中南大学肿瘤研究所实验室提供）。 　　1.2 方法 　　1.2.1细胞培养　人乳腺癌细胞培养于含10%小牛血清、青霉素（100U?mL-1)、链霉素(100U?mL-1)双抗的RPMI-1640培养基中，在37℃、体积分数为5％CO2、相对湿度90%的培养箱中培养，定期观察细胞生长情况。每2～3天用0.25%的胰酶消化，进行传代培养。实验所用细胞均处于对数生长期。 　　1.2.2 MTT比色法检测细胞增殖活性　细胞以5times;104个?mL-1的密度接种于96孔培养板中。实验组和阴性对照组每孔加细胞悬液100mu;L，空白孔不加细胞，置于CO2培养箱中培养过夜，待细胞已完全贴壁后，小心吸去96孔板内上清液。实验组每孔加入含不同浓度曲马多（0.01,0.1,1,10,100mu;mol?L-1）的RPMI-1640培养基200mu;L，阴性对照组与空白调零组只加培养基200mu;L。每组设六个平行对照孔。孵育48h后，每孔加5mg?mL-1的MTT20mu;L后继续培养4h，小心吸掉上清液(注意勿将沉淀在下面的紫色颗粒吸掉)，每孔加DMSO150mu;L，摇床上轻摇10min，至紫色颗粒充分溶解后，用酶联免疫检测仪于570nm测定波长，630nm参照波长下测定每孔的吸光度（OD）值。