青蒿毛状根悬浮培养中钕对生长和青蒿素合成的影响研究.pdfVIP

青蒿毛状根悬浮培养中钕对生长和青蒿素合成的影响△ 赵兵+王玉春杨成砚欧阳藩 o 中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室，北京10008 捕要：本文研究了稀土元素妆(Nd3+)对青蒿毛状根生长和青蒿素合成的影响，发现实验紊件下加^蛀 墙养蛄果表明：经过25天培养．加八钕所得到的青蒿毛状根细胞膜渗透性明显较对照高，而时口H值 却基拳无影响，和对照相比生物量提高了12．5％，青蒿素平均含量提高了29．6％，单位体积青蒿毒产 量提高了45．77％． 关t阐：青蒿毛状根 培养廿青蒿素合成 1前言 我围拥有全世界80％的稀土资源．稀土微肥的推广应用曾经大大提高了农副产品的产量，取 得了显著的经济效益f”l，但很多研究表明植物对稀土的吸收利用因植物种类而异．只有部份轻稀 土元素能促进植物生长，而有的重稀土元素甚至具有遗传毒性【“l。钕是目前发现能促进植物生长 的稀土元素之一。随着稀土元素与酶的作用机制在细胞水平和分子水平的深入研究，现在钕在细 胞培养中的生理作用逐渐引起了人们的重视m．实验中发现氯化钕处理玉米根后能降低其离子外 渗量【Bl。钕离子与叶绿素作用后引起叶绿紊吸收光谱紫移，增加了对光的利用[91。稀土元素在植 物组织、器官培养生产高价值天然药物方面具有很大的潜力。 青蒿紊是一种含有过氧基团的倍半萜内酗，是一种速效低毒的抗疟疾药物【…。目前青蒿素主 要来源于中国和越南．由于受气候等原因的影响，青蒿素的生产现在还远远不能满足市场需求． 世界各田都希望能通过生物工程手段提高青蒿素的产量I”“2I。在对稀土元素进行筛选和初步实验 的基础上，结合对青蒿素生物合成机理和影响因素的分析，加入适当浓度的钕显著地提高了毛状 根的产量和单位体积青蒿素产量．为大规模利用青蒿毛状根培养生产青蒿素莫定基础。 2实验材料及方法 2．1实验材料 植物材料：实验所用青蒿似棚扫妇∞HwL_)毛状根由中国科学院植物研究所叶和春先生课题组提 供。由发根农杆菌诱导青蒿叶片产生． 度溶液备用。配培养基时一同加入后调pH值． 2．2培养方法及条件 KNOb0．2049rL 在改良的MS液体培养基(含3％蔗糖．0．49／LNH．Nq’2．029rL KH2to,，0．379／L Mgso．7H20．0．339／LCaCl2)悬浮培养．筛选形态正常、生长旺盛、青蒿案含量高的毛状根继代．。 继代时间15天，25℃，3000Lux光照16h／d． 取继代培养的毛状根切割后作为接种材料，接种量39FW,／L培养基，分别进行摇瓶悬浮培养 ‘△：图束。九．五。科技攻关重点项目(96-C02-03-02) 和反应器(含7％蔗糖，其余同摇瓶培养)培养。摇瓶培养时在150raL三角瓶中装50raL 培养基，摇床转速为130r／min，培养时间为25天．每批实验至少重复2次。 2．3反应器培养 反应器主体由内径10cm．长30cm的扩口玻璃管及上下不锈钢法兰联接而成。气体分布器为 G3巾25ram沙式过滤器，反应器底部有20目不锈钢网，距气体分布器2cm，实验装置如图l所示。 上述联接好的反应嚣放好培养基在121℃灭20分钟，冷却后在超净工作台接种．整个反应器置于 0．5wm,16-25天30℃，通气量0．75wm。 12 卜不锈锅法兰，2．日光灯．3-扩口玻璃段，4．不锈钢筛网，5．气体分布嚣，6．除菌过滤器． 7．玻璃转子流量计，8．气体稳压装置，9．阀门．10．空气压缩机．11-揍种口．12．尾气出口 图I．反应器培养示意图 2．4样品分析测定 培养结束后．用纱布或吸水纸吸干培养物表面水分，测量培养物鲜重后，置于烘箱中40℃烘 48小时再测定其千重．按培养基体积折算为g／L表示．青蒿素含量采用紫外分光光度法测定【”】． 细胞膜渗透性测定参见焦根林等方法【。I。培养结束后，同时测定液体培养基的pH值。电导率等。 3实验结果及讨论 实验中发现钕在培养基中的浓度有一个较适宜的范围．低于或高于这个范围均