顶空气相色谱法测定P11中四氯化碳残留量研究.pdfVIP

顶空气相色谱法测定P11中四氯化碳残留量 天津药物研究院分析测试中心(300193) 宋丽明 蒋庆峰 摘要 用顶空进样气相色谱法和微池 ECD - ECD 分析 P11中四氯化碳的残留量 用 归一化法计算实验结果和样品中的残留量并进行了方法学考察 本法操作简单 实验结 果准确可靠 关键词 顶空进样气相色谱法 四氯化碳 微池 ECD P11是本院研究开发的一种新药 其生产工艺中使用到了四氯化碳 四氯化碳已被证实具 有强致癌作用和毒性 根据 ICH 人用药物注册技术要求国际协议会议 关于药品中溶剂残 留量的规定 四氯化碳被列为 一类溶剂 因此 新药审批要求必须对其残留量进行检查 1 仪器与试药: 惠普HP6890N 气相色谱仪 Agilent 7694E 顶空进样器 电子捕获检测器 - ECD 四氯化碳 分析纯 天津化学试剂二厂 二甲基亚砜 分析纯 上海试剂厂 P11由本院合成室提供 2. 试验方法及结果 2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱 HP ―624 6%氰丙基苯―94%二甲基硅氧烷共聚物 30m×0.53mm ID. df=3.00 m 毛细管柱 采用程序升温 60 维持3 分钟 以40 /min 的升温速率升至200 维持7 分钟 气化室温 度 200 检测器 - ECD 检测器温度 250 载气流速 氮气 16.7 ml/min 顶空进样器 顶空瓶 vial 加热温度 80 进样环 loop 温度 90 传送杆 温度 95 平衡时间 15 分钟 进样量 1ml 理论板数按四氯化碳峰计算不得低于2000 2.2 对照品溶液的配制 2.2.1 对照品贮备液的配制 精密移取四氯化碳适量 置于 100ml 容量瓶中 用二甲基 亚砜稀释到刻度 混匀 作为对照品贮备液 2.2.2 对照品溶液的配制 精密量取贮备液 1ml 置 50ml 容量瓶中 用二甲基亚砜稀释 到刻度 摇匀, 即得 2.3 线性关系考察 精密移取贮备液 0.5 0.8 1.0 1. 5 2.0ml 置 50ml 容量瓶中 用二甲基亚砜稀释到刻度 混匀 制成一系列浓度的对照品溶液 分别取 3ml 溶液加入到顶 空瓶中 密封 进样 1ml 记录色谱图 以峰面积为纵坐标 Y 对照品浓度为横坐标 X 进行线性回归 结果表明 四氯化碳在0~159.5ng/ml 浓度范围内 线性关系良好 回归方程见表 1 表 1 线性关系试验结果 C(ng/ml) 0 39.88 63.80 79.75 119.63 159.50 积分面积A 0 111.36 163.54 208.85 306.50 410.42 线性方程 Y=3.48+2.55X r=0.9997 2.4 精密度试验 取对照品溶液 3ml 置 10ml 顶空瓶中 连续进样 5 次 记录色谱图 按面 积归一化法计算 结果表明四氯化碳重现性良好 见表 2 对照品溶液测定色谱图见图 1 表 2 精密度试验 积分面积 220.85 224.41 229.33 225.04 224.37 平均值 224.8 RSD% 1.34 2.5 最小检测限试验 用对照品溶液 采用逐步稀释法 当组分的响应值等于基线噪 音的 3 倍是 该浓度即为最小检测浓度 在此试验条件下 测得四氯化碳的最小检测浓度为 0.32ng/ml 2.6 回收率试验 精密移取对照品贮备液 0.8ml