刨花润楠SRAP-PCR体系建立与优化-林业与环境科学.PDFVIP

林 业 与 环 境 科 学 2017 年8 月第33 卷第4 期 Forestry and Environmental Science 29 刨花润楠SRAP-PCR体系建立与优化* 1,2 2 2 2 周　鹏 　　林　玮 　　周祥斌 　　陈晓阳 （1. 广东生态工程职业学院，广东 广州510520 ；2. 华南农业大学林学与风景园林学院/ 广东省森林植物种质创新与利用重 点实验室，广东 广州510642 ） 摘要　以刨花润楠（Machilus pauhoi ）1.5 a 生小苗幼嫩叶片为试材，对影响刨花润楠SRAP-PCR 扩 增的模板DNA 量、引物、dNTP 和Mg2+ 体积摩尔浓度、Taq DNA 聚合酶、退火温度6 个主要因素进 行优化。结果表明，SRAP-PCR 的最佳反应体系为：25 μL 的SRAP-PCR 反应体系中，2.5 μL 10 ×PCR buffer 、模板DNA 量60 ng、Mg2+ 2.0 mmol/L、dNTP 0.225 mmol/L、引物0.3 μmol/L 和Taq DNA 聚合酶 1.25 U。对优化的反应体系和扩增程序的验证结果表明，优化的刨花润楠SRAP-PCR 反应体系和扩增程 序是稳定可行的。 关键词　刨花润楠；SRAP-PCR；体系优化 中图分类号：S718.43，S792.23　　文献标识码：A　　文章编号：2096-2053 （2017 ）04-0029-05 Establishment and Optimization of SRAP-PCR System for Machilus pauhoi 1,2 2 2 2 ZHOU Peng 　　LIN Wei 　　ZHOU Xiangbin 　　CHEN Xiaoyang (1.Guangdong Eco-engineering Polytechnic, Guangzhou ，Guangdong 510520, China; 2. College of Forestry and Landscape Architecture, Sourth China Agricultural University/Guangdong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm, Guangzhou, Guangdong 510642, China) Abstract　Machilus pauhoi is a tree specie with variety of economic value and development prospects. This study aimed to establish an optimized SRAP-PCR system for M. pauhoi, and the young leaves of the 1.5 years old seedlings were used as test materials. Six quality factors including the template DNA, primer concentration, dNTP concentration, Mg2+concentration, Taq DNA polymerase, and annealing temperature were optimized for M. pauhoi SRAP-PCR assay. The obtained results suggested a optimized reaction system of SRAP-PCR (total 25