微生物酶法转化巴豆甜菜碱制备L肉碱研究.pdfVIP

第二届全国发醉工程学术讨论会论文集 1998 微生物酶法转化巴豆甜菜碱制备 卜肉碱研7L* 孙志浩 王 蓄 郑 玻 金梅 (江苏省徽生物研究所 无锡 214063) 摘 奥 进行了徽生物的法转化巴豆甜菜碱制备 卜肉碱11沏步研究.通过帅选和诱变得到一株产L-肉碱水解 酶活力高的菌株大肠杆菌FseherlchiacotlSW13-C,07,在最适多矛下卜水解15g/,巴豆甜菜碱，最高可得到7g/LL- 肉碱，mol转化率为42%。巴豆甜菜碱可以用拆分废弃物D-肉碱脱水伟咯. 关扭词 L-肉破 。巴豆甜菜碱，大肠杆菌，醉法转化 L-肉碱让-carnitine)，又称维生素氏，化学名为L-d一轻基y一三甲按丁酸(1i-hydroxy-y- butyrobetaine),是动物体内与脂肪酸代谢有关的化合物。它的主要功能是作为载体将长链脂肪酸 从线拉体膜外输送到膜内促进脂肪酸的p一氧化。临床上L一肉碱作为药物主要用于治疖b力衰蝎， 缺血性心脏病，J已律失常.阳氏血脂，治疗月F1拌症以及治疗肉碱缺乏综合症，还作为高能输液使用。 它也是一种重要的机自qt 食品添加剂，用于婴儿和体弱多病者的强化营养，增强运动耐力以及减肥健 美。另外，作为饲料添加剂也得到了广泛应用。u.乃 用合成DL-肉碱进行拆分的方法，收率低，成本高.我们从 1994年开始进行酶涅踌季化制备L- 肉碱的研究，利用微生物所产生的L-肉碱水解酶(L-Carnitinehydrolyase)水解巴豆甜菜碱生成L- 肉碱.巴豆甜菜碱可以用环氧抓丙烷廉价合成.亦可从 DL一肉碱或其拆分废物D一肉碱脱水制备， 因此可望成为一种高效率，适合于产业化的制备L-肉碱的低成本方法。 材料与方法 11 徽生物菌种 ProteusvirabilisATCC12453,EColiSW13-12,本课题组保藏.EColiSW13-Co17，中国普通 微生物菌种保藏中心保藏 (CGMCC0276)。 1.2试剂与原材料 巴豆甜菜碱由DL-肉碱脱水制备，L-肉碱标准品及酶法测定试剂购自Sigma,其他试剂与原材料市 售。 1.3橄生物培辞荃及产蔺条件 1.3.1斜面培养基:肉汤琼脂. 1.3.2发酵培养基:富马酸2%,蛋白陈1%,醉母膏1%,磷酸氢二钠0.3%，硫酸钱0.5%.硫酸镁 0.05%, 磷酸二氢钾0.浅 巴豆甜菜碱0.钱 pH7.0 1.3.3发醉产酶方法: 斜面培养:30C 24h 摇瓶培养:30C 24h，150r/min，三角瓶装量75m1/500m1(或限氧). 粗酶收集:3000Xg20min离心· 1.4翻委化方法 1.气1底物溶液:巴豆甜菜碱1.5%. 1.4.2酶转化反应:按所需酶浓度加底物溶液 搅匀，3TC保温静止转化24h,离D取上清液，酶回 收继续反复分批转化. 1.5 产物恨取纯化方法 i菌wjtHIA奚质百-一 一333- 第二届全国发醉工程学术讨论会论文集 1998 1.6 分析万 活 1.6.1L-肉碱含量测定:酶法(Dm 澎 。ral 1.6.2iPLC测定由天津药物研究院测定，红外光谱由无锡轻大理化中心测定。 2 结果 2.1产蔺苗株选育 2.1.1初筛 参照文献报道具有巴豆甜菜碱水解酶的徽生物种属，从本课题收集保藏的现有菌株中筛选，得 到四株具产肉碱能力的试验菌株，采用前述摇瓶产酶，用已豆甜菜碱底物(15g/L)进行酶转化，其产酶 结果比较见表1. TablelScsemingofL-camitnoToducnigstmin Strain -一一一一-一一 L-Camitineproduced( - . 一’L P-MWmhnWifATCC12453一一一一一下L67— 一 --一’一