部分玉米自交系性状的聚类分析.DOC

玉米自交系盐溶蛋白聚类分析 赵宁娟1 孟庆立1 张宇文1 雷绪劳1 （1.陕西省宝鸡市农科所，陕西 岐山722400） 摘要：关键字：玉米 自交系 盐溶蛋白 聚类分析目前，杂种优势用是玉米的主要手段。亲缘关系，建立相应的杂交优势利用模式，将极大减少的盲目性，提高育种效率。认为，聚类分析结果与自交系血缘有紧密联系，亲缘关系不同的自交系归入不同类群，同一类群中遗传差异较小，类群间遗传差异大，在实践中，可有目的选择亲缘不同，来自不同类群的自交系杂交，获得强优势组合1-4]。 当前玉米自交系类群划分主要有：农艺性状聚类配合力同工酶技术生化指纹图谱分子标记技术蛋白质电泳。有些学者认为，聚类分析对自交系类群划分有很大的局限性5,6]；配合力测定结果虽然可以准确划分自交系类群，但受气候环境影响较大，耗时较长；同工酶技术、生化指纹分析和分子标记技术要求较高的设备条件和较多的试验费用。而蛋白电泳效率高、花费少，能够反映自交系之间在分子水平上的差异，基本可以满足分类研究的需要[7]。牛应泽等根据醇溶蛋白和盐溶蛋白区分不同玉米品种，认为在玉米品种鉴定中盐溶蛋白比醇溶蛋白有优势。虽然玉米种子盐溶蛋白含量较少，但其分子多态性和品种的异质性是较大的，不同种之间的谱带存在明显差异且清晰稳定。本试验运用改进的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对87个玉米自交系种子进行聚类分析旨在本单位玉米自交系类群，期望提高玉米育种工作效率。 1材料与方法 1.1供试材料 供试材料为87个自交系其中1.2试验方法 1.2.1 盐溶蛋白1.2.1.1 蛋白质提取 随机抽取完整玉米颗粒。将单粒玉米干种子磨碎后，移入1.5ml离心管按体积比1:1加入提取液（含0.58%NaCl、20%蔗糖和0.015%甲基绿），混匀，室温下每隔5min摇晃，放置1h10 000×g离心15min取上清电泳。 1.2.1.2电泳 在室温下，采用220V电压，用溴酚兰作指示剂，待溴酚兰跑至底部0.5cm处停止。浓缩胶浓度4.9%，分离胶浓度13.8%。 1.2.1.3 染色 电泳后，凝胶在考马斯蓝染色液中染2h，用清水漂洗至背景无色。用数码相机拍照得到图1。重复3次，以确保条带稳定。选择清晰可辨重复性好的照片进行谱带统计。在相同迁移位置有带的记为1”无带的记为0”。 1.2. 聚类分析 用NTSYSpc2.1软件进行聚类分析。 2 结果与分析 2.1盐溶蛋白图谱分析 图1 盐溶蛋白图 对87玉米自交系种子盐溶蛋白进行电泳，结果见图1。为选取图谱丰富，深色带多、分布范围广，无电泳生物型变异标志带。图2 87份玉米自交系聚类图谱 聚类分析图谱见图287个玉米自交系被分成两大类，K22、掖478、、郑58、铁7922H21、502、吉853、昌7-2结果表。 表 87个玉米自交系类群划分结果 类群 Group 自交系数目 Number of inbred 自交系名称或编号 Name or code of inbred Ⅰ：Reid 3 K22、掖478、、郑58、铁7922、1、2、12、13、5、24、6、16、17、4、31、11、8、14、15、10、26、28、29、30、34、21、22、25 Ⅱ：非Reid Lancaster 3、Mo17、自330、 其他 H21、502、吉853、昌7-2、 在第I类群中，掖478K12、H21、502四平头标志自交系。K12是以玉米自交系黄早四和西南亚热带种质为基础材料运用品系内群体轮回选择与自交系谱法选择选育而成的优良自交系H21是超黄早4为主要目标的早熟粒型玉米自交系选育研究结果。502是丹340×黄早4的二环系，含有黄早4的血缘。吉853Lancaster群改良四平头，得到的优良自交系。路明等发现吉853和黄早四之间的遗传相似性最大(GS=0.71)与自330有较大的遗传差异(GS=0.55) 。3 讨论 我国杂优模式复杂，一方面由于一些育种单位材料来源有限，育种模式只能集中在局部种质，另一面由于PA、PB本身，甚至Lancaster都含有来源于对立面的种质。如PB含有少量ReidPA中含有少量Lancaster，来源的混杂导致了品种来源纯度下降，而影响聚类分析。近几年我国玉米育种的模式，正在走向国际通用的A/B模式，或者说是Reid/非Reid。 本研究聚类分析一定程度上反映了自交系间的血缘关系，但并不是绝对。孙世孟等[]、池书敏等[1]、袁立行等[1]的研究中也出现了类似结果。这些结果的出现可能有以下几方面：1试验方法的局限性。因蛋白质水平上的差异相对较小，标记又具有随机性，并不一定能均匀地分布于基因组上。2.育种专家在选育自交系过程中，受各种主客观条件的影响，容易出现外来基因的侵入或自身某些位点基因漂移，使遗传基础发生变化。3.早