PTEN在纤维化肝组织中的动态表达及其对肝星状细胞增殖与凋亡的影响.pdf

中文摘要 PTEN在纤维化肝组织中的动态表达及其对 肝星状细胞增殖与凋亡的影响 摘 要 肝纤维化(hepatic 而发展为肝硬化的共有病理改变和必经途径，是肝脏对各种慢性损伤产生 matrix，ECM) 的一种修复反应。其主要病理改变是细胞外间质(extracellular stellate 的过度合成与异常沉积。肝星状细胞(hepaticcells，HSC)是参与该 过程的最重要细胞，它的激活导致自身增殖和胶原合成增加被认为是肝纤 维化形成的中心环节，而肝纤维化恢复期HSC凋亡明显增多。因此，抑 制HSC活化、增殖或诱导其凋亡是逆转肝纤维化的关键所在。 and tensin deleted onchromosome homology Ten，PTEN)是迄今发现的第一个 具有磷酸酶活性的肿瘤抑制基因，可负性调控肿瘤细胞细胞周期、抑制肿 瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡，其缺失或表达异常与多种肿瘤的发生发 展密切相关。 近年来，对PTEN的研究己从肿瘤领域逐渐延伸至非肿瘤领域。研 究表明，在特发性肺纤维化患者的肺组织中，成纤维细胞的PTEN表达及 其磷酸酶活力都低于正常肺成纤维细胞；并且其过表达或激活可抑制体外 肺成纤维细胞增殖、诱导其凋亡。在有关PTEN与心肌纤维化的研究中也 显示PTEN基因敲除的小鼠心脏与体重之比增加、心肌纤维化程度明显、 心肌收缩性降低。这提示PTEN的低表达或失活参与了特发性肺纤维化及 ．心肌纤维化的发生。而在PTEN与某些肝脏疾病的研究中，有研究发现特 异性肝细胞PTEN缺失不仅可引起肝细胞癌而且还导致与肝纤维化密切 相关的非酒精性脂肪性肝炎的发生。但迄今为止，PTEN在肝纤维化中的 表达及作用，特别是对HSC增殖及凋亡的影响仍不清楚。为此，本研究 应用胆总管结扎法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型，探讨PTEN在肝纤 维化过程中的动态表达及其与在体HSC增殖、凋亡的关系；并进一步将 中文摘要 的影响，同时探讨PTEN调控活化HSC增殖、凋亡及细胞周期的信号转 导机制，旨在为深入揭示肝纤维化的病理生理机制，寻求有效预防和治疗 肝纤维的新策略提供实验依据。实验内容主要包括以下四部分： 第一部分PTEN在大鼠纤维化肝组织中的动态表达及其与在体肝星状细 胞增殖、凋亡的关系 目的：研究大鼠肝纤维化过程中肝组织的PTEN动态表达及其与在体 HSC增殖、凋亡的关系。 方法：胆总管结扎法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型，HE、Masson 三色染色观察肝脏病理组织学变化，免疫组织化学染色检测大鼠肝组织中 muscle PTEN及仅．平滑肌肌动蛋白(alpha．smoothactin，a．SMA)的分布；免 疫荧光双标记共聚焦激光扫描显微镜技术测定大鼠肝组织中活化HSC的 PTEN表达；末段脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末段标记 blot和Real．time Q．PCR检测大鼠肝组织中PTEN蛋白及mRNA表达。 结果：@HE及Masson三色染色显示，胆汁淤积性大鼠肝纤维化模 型成功建立，随着造模时间延长肝纤维化程度逐渐加重。在造模不同时间 均可见不同程度的肝细胞变性坏死而导致正常肝细胞逐渐减少。②0【．SMA 免疫组织化学染色显示，正常大鼠肝组织中仅在血管壁平滑肌细胞有弱阳 性表达；随着肝纤维化的发展，大鼠肝组织中0【．SMA阳性细胞逐渐增多， wk、2 造模1 wk、3wk及4wk不同时间大鼠肝组织0c．SMA的阳性光密 度值(O．16±0．01，0．17±0．01，0．21