大鼠星形胶质细胞培养方法的改进.pdfVIP

· 12· 徐州医学院学报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU 2014，34(1) 大鼠星形胶质细胞培养方法的改进 李会，徐岩，侯筱宇 (江苏省脑病生物信息重点实验室 ，徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心，江苏 徐州 221002) 摘要：目的 改进星形胶质细胞的体外纯化培养方法 ，为研究星形胶质细胞的生物学功能提供实验模型。方 法 采用新生sD大鼠，无菌操作取其大脑皮质，用0．025％的胰酶吹打消化成单个细胞，替代传统的0．25％的胰 酶水浴消化 15min，单个细胞悬液接种于预先包被好 PDL的24孔板或25am 的细胞培养瓶 中，体外培养9～l4 天至细胞完全融合并铺满瓶底后进行传代。第2代细胞应用抗GFAP的抗体进行免疫荧光染色来鉴定星形胶质 细胞的纯度。结果 免疫荧光染色结果显示这种培养方法分离培养出的星形胶质细胞纯度达到90％以上。结 论 采用本实验改进的方法，培养的大鼠星形胶质细胞纯度高、生长状态 良好 ，符合体外研究要求。 关键词：星形胶质细胞；细胞培养；大脑皮质；大鼠 中图分类号：Q26；R329．24 文献标志码：A 文章编号：1000—2065(2014)O1—0012—03 Modificationofprimaryratastrocytecultures LIHui，XU Yan，HOU Xiaoyu (JiangsuKeyLaboratoryofBrainDiseaseBioinofrmation，ResearchCenterforBiochemistryandMolecularBiology， XuzhouMedicalCollege，Xuzhou，Jiangsu221002，China) Abstract：Objective Toestablishamodifiedprimaryculturesystemforratastrocytestofacilitatethebiologicalin- vestigationofthecells．M ethods Thecerebralcortexwasremovedfrom newbornSD ratsundersterileconditions，and thenbrokenintosinglecellsby0．025％ trypsasewith gentleagitationinsteadoftraditionaldigestionwith0．25％ tryp- saseunderabathat37℃ ofr15minutes．Theresultantsinglecellsuspensionwasseededontopoly—L—lysine—coated 24一wellplatesor25cm2一flasks．Afterinvitrocultivatedofr9—14days．thecellswerepassagedatnearly100％ con- fiuence．Thesecondgenerationwasstainedwithanti—GFAPantibodytoidentifythepurityofastrocytesthroughimmuno— fluorescencetechnique．Results Thestainingresultsshowedmorethan90％ ofthepurityofisolatedastrocytes．Con· clusion Thismodifiedculturetechniquecanbeadoptedtoproduceratastrocyteswithhigherpurity，settingupgood foundationofrfurtherbiologicalstudyinastrocytes． Keywords：astrocytes；cellcuhure；cerebralcortex；rat 胶质细胞在哺乳动物 中枢神经系统 (central 递等