第7章 分子发光.pptVIP

第七章 分子发光分析法 §1 荧光分析法 一、概述 灵敏度高，检出限比分光光度法低2~4个数量级。选择性也好。 适用范围较小，主要用于生物物质。 二、基本原理 （一）荧光和磷光的产生 荧光与磷光的比较： （1）荧光是由激发单重态最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的; 磷光是由激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的. 激发光谱曲线 （三）荧光效率及其影响因素 1、荧光效率 2、荧光与分子结构的关系 物质只有能吸收紫外可见光，才可能发荧光。 分子的刚性平面结构有利于荧光的产生。 3.环境因素对荧光的影响 1、溶剂的极性：电子激发态比基态有更大的极性。溶剂的极性增强，对激发态会产生更大的稳定作用，使物质的荧光波长红移，荧光强度增大。 5、表面活性剂：使荧光物质处于更有序的胶束微环境中，对处于激发单重态的荧光物质分子有保护作用，减小非辐射跃迁的概率，提高荧光效率。 （三）荧光强度与溶液浓度的关系 三、荧光分析仪 I0 四、荧光分析法的应用 （一）无机化合物---金属离子 与芳香族化合物形成络合物，使分子的平面刚性结构增大，原来不发光或发光较弱的化合物转变为强荧光化合物。 无机离子与发荧光的物质反应形成无荧光物质。根据荧光减弱的程度进行测定。 §2 磷光分析法 一、原理 三 磷光分析仪器 §3化学发光分析法 化学反应的化学能激发反应产物分子至激发态，受激分子辐射发光。 化学发光分析的特点 灵敏度高 10-12 g?mL -1 测定的线性范围宽 5~6个数量级 仪器设备简单 没有激发光源，检测发光总量。 分析速度快 二、基本原理 （一）化学发光的条件 （二）化学发光效率和强度 （三）化学发光反应的类型 （2）气相化学发光 主要有O3、NO、S的化学发光反应，可用于监测空气中的O3、NO、SO2、H2S、CO、NO2等。复印 三、化学发光分析仪器 样品室、光检测器、放大器和信号输出装置 * 激 发 模 式 不 同 光致发光 热致发光 场致发光 化学发光 荧光 磷光 S0 S2 S1 T1 吸光?1 吸光?2 振动驰豫VR：在同一电子能级中，分子由较高振动能级向该电子态的最低振动能级的非辐射跃迁。 内转化ic：相同多重态的两个电子能级间的非辐射跃迁。 荧光F：处于第一电子激发单重态最低振动能级的分子，以辐射跃迁形式返回基态各振动能级。 体系间窜跃isc：不同多重态的两个电子能级间的非辐射跃迁。 磷光P：处于第一电子激发三重态最低振动能级的分子，以辐射跃迁形式返回基态各振动能级。 （2）激发单重态的平均寿命大约为10-8s,荧光产生快，而激发三重态的平均寿命为10-3--10s，磷光产生稍慢。 磷光寿命比荧光长 。 （4）不论电子开始被激发至什么高能级，荧光和 磷光的波长都是固定的。 （3）磷光辐射的波长比荧光长 以不同波长的光激发荧光物质，并在荧光最强的波长处测量荧光强度。以激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制得到激发光谱曲线。 荧光光谱曲线 固定激发光的波长和强度不变，测量不同波长下的荧光强度。以荧光发射波长为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制得到荧光光谱曲线。 （二）荧光的激发光谱与发射光谱 激发光谱 发射光谱 吸收光谱的各个谱带间隔与激发态的振动能级能量差对应，荧光的发射谱带间隔与基态的振动能级能量差相等。因而，激发态与基态的振动能级间隔类似时，吸收光谱与荧光光谱呈镜象对称。 吸收光谱可以有几个吸收带，而荧光发射总是从S1??S0的过程，一般只有一个发射带，且与激发波长无关（形状固定）。同时发射的量子产率基本上与激发波长无关。 kf为荧光发射过程的速率常数，?ki为其它有关过程的速率常数的总和。 一般来说，kf主要取决于化学结构，而?ki则主要取决于化学环境，同时也与化学结构有关。 共轭效应能增大荧光物质的摩尔吸光系数，有利于产生更多的激发态分子，从而有利于荧光的发生。 容易实现???*激发 的芳香族化合物容易发生荧光，而能发生荧光的脂肪族和脂环族化合物较少（仅少数高度共轭体系化合物除外）。 0.46 400nm 蒽 0.29 310nm 萘 刚性平面结构可以减少分子的振动和碰撞去活的可能性。 给电子取代基能增强荧光。 如-OH、-OR、-CN、-NH2 、 -NR2等 吸电子取代基能减弱荧光。 如-COOH、-NO、-C ?O、卤素等。 重原子效应减弱荧光，增强磷光。 能级交叉现象严重，容易发生自旋轨道偶合作用，使体系间窜跃显著增加。如卤素取代基。 芴 ?f=1 联苯 ?f=0.20 n??p*跃迁的