下呼吸道细菌学检验操作规范(讨论稿)PPT.ppt

《下呼吸道细菌学检验操作规范（讨论稿）》;前 言;分析前下呼吸道标本检验;标本拒收规则;污染痰标本和气管内标本革兰染色拒收条件的评价（痰涂片 20－40/LP；气管吸出物低倍镜和油镜下都要检测）;门诊接受到大量脓性标本，应立即接种，不必等待涂片结果。 拒收培养标本报告方式： “涂片所见：每低倍镜视野含＝10个扁平上皮细胞，提示标本质量差，不做培养；如果有临床指征请重新采集标本” “涂片检查40个视野，未见细菌，不做培养；如果临床指征请与实验室联系” 不能拒收标本 送检军团菌培养、抗酸染色痰标本、气管吸出物和来自囊性纤维化患者的痰标本;分析中下呼吸道标本检验;标本接种 血平板、巧克力平板和麦康凯（或中国蓝/伊红美兰） 以下步骤可选择一项或多项： 在接种后的巧克力平板上贴杆菌肽纸片（10IU），用于抑制上呼吸道微生物菌群，提高流血嗜血杆菌检出率 用金葡ATCC25923点种接种后的血平板，便于直接观察嗜血杆菌的卫星现象 血平板的第二个1/4区贴奥普托辛(OP)纸片，可在原始平板上直接检测抑制肺炎链球菌的生长。不推荐常规使用，如有大量社区感染肺炎患者标本时可考虑使用;培养 35－37℃、5%CO2条件培养48h，最好至72h； 侵入性方法采集的肺标本，培养延长至4天 ;直接试验 革兰染色 注明细胞、细菌量以及评价结果 见表3 胆汁溶菌试验 革兰阳性双球菌;表3 痰涂片革兰染色结果解释;指征;培养结果检查 观察24h后平板 继续培养平板24－48h，为检出霉菌、慢生长菌、苛养的革兰阴性杆菌如博德特菌属 革兰染色结果解释培养结果 炎性细胞和细菌来决定对培养物下一步处理 如培养与涂片不符，重新读片 按照表4报告 鉴定以下有临床意义的可疑致病菌，排除正常菌群;常见呼吸道重要致病菌 链球菌 苛养革兰阴性菌 革兰阴性双球菌 革兰阴性杆菌 葡萄球菌 革兰阳性杆菌;链球菌 Beta-溶血、触酶阴性呈链状或成对排列的球菌 化脓链球菌（PYR+）任何数量都要报告 患儿标本检查有小溶血环并鉴定B群-溶血链球菌，任何数量都要报告 优势菌时，有意义数量的Beta-溶血链球菌 不要报告小菌落的beta-溶血链球菌或F群链球菌，因为这些菌是上呼吸道正常菌群;链球菌 Alpha-溶血链球菌 Optochin敏感实验 胆汁溶菌实验 （联合上述两个实验进行鉴定） 药敏实验，贴OP纸片确认纯度以检查药敏结果是否有污染;苛养革兰阴性杆菌 流感嗜血杆菌，卫星现象，ALA实验确认鉴定并作beta-内酰胺酶试验。 百日咳博德特菌 触酶和尿素酶阳性，培养48h出现肉眼可见菌落 巴斯德菌 吲哚和氧化酶阳性，动物口腔正常菌群 侵蚀艾肯菌 上呼吸道正常菌群，无需鉴定;革兰阴性双球菌 卡他莫拉菌 G-双球菌，氧化酶阳性，血平板上可推动，丁酸盐试验阳性 淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌？ 需检验并报告，不需做药敏试验 当培养达到有意义数量时，即使不是优势菌，也报告（表4）;在麦康凯或伊红美兰平板生长良好的革兰阴性杆菌 革兰阴性杆菌 鉴定和药敏试验 对于住院患者，不管是否有其他病原菌，检查有意义数量的铜绿假单胞菌、不动杆菌、博克霍尔德菌和嗜麦芽菌 囊性纤维化患者标本有特殊要求;囊性纤维化患者标本操作规范;葡萄球菌 痰涂片显示有优势的呈堆球菌并与白细胞相关，没有其他致病菌时，鉴定有意义菌量的金黄色葡萄球菌 住院患者，鉴定并作苯唑西林耐药 仅当菌量达到90%纯培养时，鉴定凝固酶阴性葡萄球菌，无需鉴定到种水平，无需做药敏;肠球菌 不要报告肠球菌，除非达到90%纯培养 很多革兰阳性球菌都是呼吸道正常菌群;革兰阳性杆菌 排除任何数量来自免疫抑制患者的奴卡菌和马红球菌（粘液样并尿素酶阳性） 马、猪等动物致病菌，可条件致病，可以导致免疫抑制患者的肺炎 大芽孢革兰阳性菌，则需排除炭疽芽孢杆菌和腊样芽孢杆菌 快速尿素酶阳性（假白喉棒状杆菌），或标本来自ICU插管患者时，鉴定大量优势的棒状杆菌 其他革兰阳性杆菌不会引起肺炎，无需鉴定;霉菌 念珠菌不能引起肺炎，除非肿瘤患者、肺移植患者或新生儿。酵母菌是口腔正常菌群。 ;如果涂片时见到细菌但培养不生长，扩大培养，可能存在军团菌、百日咳博德特菌和分枝杆菌。;表4 下呼吸道培养致病菌报告指南 表6 常见可疑菌落形态及快速经典方法初步鉴定;检测;检测;分析后下呼吸道标本报告 分析后报告结果 革兰染色不要报告涂片中所见的少量菌（1/20视野）；如果未分离到涂片中所见细菌，在报告中注明。 如果任何平板上都没有细菌生长，报告“无致病菌生长或正常上呼吸道微生物”，注意抗生素抑制生长 阳性报告 参照表4指南报告结果和药敏；药敏结果依据CLSI 结果解释 阳性???意假阳性（携带菌）；阴性不能排除感染;局限性 常规培养方法不生长