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利用AFLP标记进行榧树雌雄株鉴定
摘 要
Fort)的雌雄株鉴定开展了研究，获
利用AFLP标记，就榧树(Torreyagrandis
得了以下结果：
1．首次采用CTAB裂解．硅珠吸咐法，成功提取了榧树叶片和胚乳高质量的DNA，
其OD26clOD280值大多在1．8．2．O之间，且琼脂糖凝胶电泳条带明亮、清晰。
2．首次建立了适合榧树叶片和胚乳的AFLP实验体系，为今后榧树分子生物学研
究、构建遗传图谱奠定了基础。AFLP实验体系具体如下：
I、
EcoR
I、T4连接酶、M接头、E接头、100xBSA、10
酶切连接过夜，12h可酶切完全。
I
预扩引物和EcoR
rain。
延伸60s，25个循环；72℃延伸5
选择性扩增优化体系：20“l的反应体系中有模板DNA，dNTP，M92+，脚聚合酶，
Mse
I选扩引物和＆DRI选扩引物，缓冲液。PCR扩增程序：95℃变性30s，65℃退火
s，56℃退
40s，72℃延伸60S，13个循环，每个循环退火温度降低O．7℃；95℃变性30
火40s，72℃延伸60s，25个循环，最后72℃延伸5min。
选择性扩增产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，并进行银染。
3．从64对选择性扩增引物中筛选出了适合胚乳AFLP分析的引物组合20对，适
合叶片分析的15对，既适合胚乳又适合叶片的引物7对。
4．利用AFLP分析技术，用引物对E．AGC／M．CAT得到一条雌性榧树特异的条带。
5．这条榧树雌性性别特异性条带，仅可以对榧树的雌、雄株进行鉴别，不能区分
雌株与雌雄同株的个体，也不能区分同是雌性的品种香榧与其它自然变异类型的榧
树。研究结果可应用于生产，解决榧树章期雌雄株鉴别的问题。
关键词：榧树；香榧；AFLP；叶片；胚乳
Abstract
been tothe
fragmentlengthpolymorphism)has
AFLP(amplified applied
ofthemaleandfemalein Fort．The
differentiation Torreyagrandis havebeen
following
obtained：
1．Itisthefirsttimeto isolate DNAfrom
successfullyhighquality leavesand
of aCTAB—silicon—basedmethod．The
TorreyagrandisFort．by DNAextracted
endosperm
hadan valuebetween1．8-2．0andwas andclearwhen
OD260／OD280 bright
in
agarose
electrophoresizedgel．
the timet
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