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关于鉴定抗根结线虫研究方法的综述 摘要：根结线虫是世界上对植物破坏最大的病原体之一，鉴定与筛选抗根结线虫的植株具有重要意义。本文概述接种源的获取方法及其对接种线虫的影响与鉴定方式，鉴定方式包括一般接种、高持续接种与组织培养基内接种。 关键词：根结线虫;接种;组织培养 Review on the way of selecting plants to resisting root-knot nematodes Qiao Feng, Wang Jingmin, Li Jinghua Abstract: Root-knot nematodes (RKN) were one of the pathogens damaged to plants mostly in the world. It was important to select the plants resisting RKN. The article mainly talked about the ways of getting RKN and how to the ways effected the inoculation, how to selecting the resistance plants, including the general inoculation, the high and durable inoculation, the inoculation in the plant medium. Keywords: root-knot nematodes; inoculation; tissue culture 根结线虫（Meloidogyne spp.）能够侵染热带与温带植物的根系，是世界上对植物破坏最大的病原体之一[1]。目前，药剂防治效果都不是很理想，而且一些高毒有效的杀线剂已被禁止使用。生产中可以通过栽培持续高抗的品种，以达到防治RKN的目的。因此，需要一种简便、快速的抗性品种的鉴定筛选方法，尤其是木本植物。本文介绍接种源的获取方式及其对抗性筛选的影响与最常用的鉴定方式，如一般接种、高持续接种、扦插与组培获得幼苗后接种、组织培养基内接种，以及适用于木本植物的发根农杆菌介导的组织培养接种，并指出抗线虫植株鉴定筛选的趋势是向快速、简便的分子标记方向发展。 1 接种源的获取方法及其对接种RKN的影响 一般RKN的接种源分为卵块、卵、二龄幼虫（Second-stage juveniles，J2)，由于卵块的收集需要一定长的时间，而且每个卵块中卵的数量不一致，不能够形成一定的接种标准，其次，接种时，由于是卵块，不能够较均匀的分散在植物根系的周围，最后，其他病原体与根腐病菌可通过卵块侵染植物，引起病害。J2从获得到接种的时间必须要短，以防止J2死亡，侵染能力下降，另外还要保证J2比较适宜的生活条件，防止J2死亡或侵染率下降。相对而言，卵的获得较方便快速，可以通过NaClO溶液冲洗的方法[2]获得，同时，卵的表面被消毒，不会携带任何病原体，接种时，可以制定一定浓度的悬浮液，做到接种量上的统一，并且可以均匀的侵染植物根系。 接种源不同的获取方法对RKN的侵染都有一定的影响。根据Hussey 1973的报道，用离心[3]或机械粉碎获得卵的方法对其孵化与侵染都有一定的破坏作用，如卵的孵化率降低与卵的数量减少，在潮湿环境中，孵化的RKN侵染率更低。用1.05% NaClO溶液冲洗[2]获得卵的方法对其孵化与侵染影响都比较小，表明用1.05% NaClO溶液冲洗收集到的卵作为接种源最为合适。 2 鉴定方式的研究 2.1 一般的接种方法 在鉴定筛选抗性植株中，常用含有一定数量的J2悬浮液进行接种[3]。通过控制每株植株所用J2悬浮液体积控制RKN的接种量。具体操作为用移液枪在距离植物茎1cm左右处，注射到2cm深的小洞中，到7d后或30d左右观察植株根系的变化，即根结的数量、根结指数，或到30d左右测定每克根中卵、J2或雌虫数量（线虫的数量可以通过酸性品红染色的方法进行计数），从而确定植株的抗性级别。木本植物中，常用根结指数的分级标准[4]:0=0%;1=1%-10%；2=11%-30%；3=31%-70%；4=71%-90%；5＞90% 。该方法简便、快速，接种量虽然是标准统一，但是在筛选抗性植株中不容易区分高抗的植株。 2.2 高持续接种 该接种方法能够弥补一般接种方法无法明显区分高抗植株的缺陷，可以连续大量的对筛选植株进行接种，获得的抗性植株较准确。具体操作[5]：在接种前，培育大量感病的番茄苗，当番茄长到5叶龄时，接500 J2；两个月后，一部分去掉接种番茄的上部，把它的根与土壤整体移到需要鉴定植株的营养钵内，一段时间后，测定根结数等指标；另一部分，也去掉上部，从开始