RNA干扰沉默STAT5A基因诱导肝癌细胞HepG2凋亡研究.pdfVIP

细胞HepG2凋亡……1 OOOOOlO0eOoo oOOOO aO 1．5 结果···……···I o O0……···……···l e*O······……24 00000eJoooo0e0eoo……000004)00 1．6 讨论………………………O 0………31 nt o eoosooeeso o…………………37 1．7 结论……………………………eo QJedoOOegJ o00eeBoloo………IIII 1．8 参考文献…4Jo dlIllIIIIIII……………………38 O 0IIIlilt 1．9 英汉缩略词对照表………t qPt……………………………41 2 致谢·····································································42 3 STATs与肿瘤治疗的研究进展(综述)……………………43 J：111 摘 要 细胞中STAT5A基因表达的特异性抑制作用及其对肝癌细胞凋亡的影响， 为干扰STAT5基因作为肿瘤基因治疗新策略的应用提供实验依据。方法： 电泳分离，纯化回收大片段。将退火形成的双链DNA通过T4DNA连接 阳性克隆菌落进行摇菌扩增，并抽提纯化质粒，然后将抽提的重组质粒进 行XhoI单酶切和琼脂糖电泳分析，同时做测序鉴定以确定插入的干扰片段 生长状态良好并达到指数生长期时，于转染前一日接种于6孔板中，并设 的转染效率，以每孔脂质体7．51上1、重组质粒3鹏配成转染复合物，加入各 细胞所占比例，以此来判断转染效率。接着用TRIzol试剂分别提取各组细 胞总R2qA，并应用核酸定量分析仪及琼脂糖凝胶电泳检测所提取RNA样 磷酸脱氢酶)为内对照进行两步法逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)，琼脂 糖凝胶电泳分析，并用灰度半定量检测各组S丑盯5AmRNA的相对表达量； 另在转染后72h进行FITC／PI双染每组细胞后流式细胞仪检测细胞凋亡情 况。 结果： 和 染HepG2细胞后48h荧光显微镜下观察，转染效率约为65％以上。 增产物条带(452bp)的亮度均明显弱于其它二组。灰度扫描半定量结果显 HepG2细胞中STAT5A mRNA相对表达量分别与空白组、阴性 干扰组、STAT5A．2干扰组STAT5 而空白细胞对照组与HK组之间相比，无显著性差异(PO．05)。④通过流 细胞凋亡显著，凋亡率分别为37．33％和33．93％；空白细胞对照组与HK 组细胞凋亡无显著性差异。结论：①设计合成的shRNA干扰序列准确无 癌细胞中STAT5A基因表达，能诱导人肝癌细胞凋亡，可成为肿瘤基因治疗 的有效方法。 瘤；凋亡 induce of STAT5A RNAinterference apoptosis gene Human