中山大学 细胞生物学 第七章 细胞骨架与细胞的运动 2011.ppt

*;本章内容主要内容;细胞骨架（cytoskeleton）是细胞质中的蛋白质纤维网络体系，对于细胞的形状、细胞的运动、运输、染色体的分离和细胞分裂等起重要作用。 细胞核中也存在细胞骨架，称核骨架;;微管是由微管蛋白在微管结合蛋白帮助下组成的中空圆柱状结构。外径约25nm，内径约15nm;微管由α-微管蛋白 (tublin ） 、β-微管蛋白以非共价键结合形成的异二聚体亚基，是组成微管的基本单位 α-微管蛋白、β-微管蛋白各有一个GTP结合位点 α-tubulin上的GTP位于两个二聚体的交界处，结合稳定，既不水解也不发生交换 β-tubulin上的 GTP可为GTP或者GDP，也可交换，对微管的动态性有重要作用;三联管（triplet） A管+B管+C管 (13+10+10)，存在于中心粒、基体等处。结构比较稳定 ;微管结合蛋白（microtubule associated proteins, MAP）与微管相结合的辅助蛋白，参与微管的装配。至少有一个结构域与微管侧面相连，另一个结构域突触在外 MAP1、MAP2、tau，主要存在于神经元 MAP4 在神经元和非神经元细胞中均有，进化上保守 磷酸化与否影响MAPs结合微管的活性;突触结构域的长度决定微管聚集成束时的间距 MAP-2，有一个长的突出结构域。过量表达，微管间保持有较宽的空间 Tau，拥有较短的突出结构域，过量表达，形成包裹得更紧密一点的微管束;不同微管结合蛋白在细胞中有不同分布，执行特殊功能;微管的装配与动力学 除了特化的细胞，大多数微管是不稳定的，可快速地组装和去组装，即微管组装的动态不稳定性（dynamic instability） 微管在体外(in vitro)的组装 组装条件 微管蛋白浓度（1mg/ml 临界浓度）、pH值（6.9）和温度（37℃）、有Mg2+无Ca 2+ 、 GTP水解供能;GTP水解 β微管蛋白-GTP （T-型）→ β-微管蛋白-GDP（D-型） 水解降低了微管中亚基和相邻亚基的亲和力，使之更容易从微管一端解离 当游离亚基加到微管的速度比微管的亚基GTP水解的速度快时，微管末端就形成 微管蛋白-GTP帽（GTP cap）;微管生长和解聚 GTP结合在β微管蛋白上时，亚基之间结合比较牢固，产生直的原纤维，使其能和旁侧的另一原纤维形成强的有规律的作用，微管快速聚合 GTP水解→GDP，引起微管蛋白发生微小的构象变化，从而使原纤维卷曲，弹开，从原纤维剥离。 微管解聚的末端，可见环状、卷曲的微管蛋白寡聚体 微管的组装和解聚是不断发生的;GTP帽;微管具有极性 原纤维是由α、β异二聚体组成 在一定条件下，微管两端以不同的速率聚合，也表现出极性 微管的一端快速生长，称正端(+)，在β亚基游离的那一端； 另一端生长较慢称负端（-），在α亚基那一端;正端;踏车运动 微管两端的装配速度不同，在一定条件下，微管一端净添加GTP微管蛋白而不断生长；另一端净生成GDP微管蛋白而不断解聚，使纤维整体朝向某个方向运动。这种组装方式叫踏车运动（treadmilling） 踏车运动不是微管的主要行为特点，而是肌动蛋白的主要行为特点;体外微管的组装，有明显的几个时期 成核期（nucleation phase） 微管生长较慢，微管的一小部分起始合成，形成微管生长的模板 延长期(elongation phase) 微管生长速度大于解聚的速度，微管快速生长延长，直至微管蛋白浓度降低到一定程度。 当微管解聚和生长的速度达到一个平衡，微管的长度没有显著变化是，就达到一个平衡期（equilibrium phase） 肌动蛋白的组装也有这三个时期;细胞骨架与细胞的运动 微管在体外的组装;微管的在体内（in vivo）的组装 微管组织中心 细胞内微管通常从一个特殊的位置成核，进行微管组装，这个位置叫做微管组织中心 。 (microtuble-organizing center, MTOC)，如中心体、基体等 微管蛋白环形复合体（γtubulin ring complex，γ-TuRC）在成核中起重要作用 γ-tubulin（ γ-微管蛋白），数量比α、β-微管蛋白少很多 两种从酵母到人都很保守的蛋白，分别与γ-tubulin结合，10-13个。这样γ-tubulins再与另外几种蛋白形成一个环状复合体，即γ-TuRC 含有成核的微管负端可见该环状结构，像帽子一样使负端稳定 γ-TuRC被认为是产生13根原纤维微管的模板;细胞骨架与细胞的运动 微管在体内的组装;γ-tubulin主要存在于动物细胞的中心体、基体等 真菌和植物细胞都没有中心体。但是这些细胞都有γ-tubulin并似乎用于微管的成核作用 ;中心体（centrosomes） 中心粒(