激活剂与抑制剂对酶促反应的影响-四川大学.PDF

实验八 pH对酶活性的影响 Exp. 8 Effect of Changes in pH on Enzyme Activity 实验九 激活剂与抑制剂 对酶促反应的影响 Exp.9 Effects of Activator and Inhibitor on the Enzyme-catalyzed Reaction 一、实验原理 酶的活性，受环境pH的影响极为显著，通常 只在一定的pH范围内，酶才表现出活性，当酶活性 达到最高时的pH值称为该酶的最适pH(optimum pH )，低于或高于最适pH时，酶的活性依次降低， 酶的最适pH受底物性质和缓冲液性质的影响。 不同酶的最适pH不同。但与该酶在生物体内存在 的部位有关，例如高等动物的胃蛋白酶最适pH为 1.5～2.5，而胃液的pH与此相近，胰蛋白酶的最适 pH为8左右，而十二指肠附近肠道的pH值近乎中性。 本实验使用唾液淀粉酶(salivary amylase )来说 明pH对酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适pH为6.8， 最适温度是37 ℃。 二、实验用品 、材料 新鲜并稀释200倍的唾液 2、试剂 （1）0.5%淀粉溶液:称取0.5g淀粉溶于0.3%NaCl溶液 中。 （2）0.2M磷酸氢二钠溶液 （3）0.1M柠檬酸溶液 （4）碘化钾—碘液:将KI 20g及碘10g，溶于100ml蒸 馏水中，使用前，稀释10倍。 3、仪器设备 试管及试管架、2ml和5 ml吸量管、恒温水浴锅、 滴定管、50 ml锥形瓶 1 三、方法和步骤 1、取8个50毫升锥形瓶，编号。 按下表中的比例，用吸量管加入0.2M磷酸氢二 钠溶液和0.1M柠檬酸溶液，制备 pH 5.0～8.0 的8 种缓冲溶液。 表1.pH 5.0～8.0 的8种缓冲溶液的制备 0.2M磷酸氢 0.1M柠檬 锥形瓶号 缓冲液pH 二钠/ml 酸/ml 1 5.15 4.85 5.0 2 6.05 3.95 5.8 3 6.61 3.39 6.2 4 7.28 2.72 6.6 5 7.72 2.28 6.8 6 8.24 1.76 7.0 7 9.08 0.92 7.4 8 9.72 0.28 8.0 2 制备稀释200倍的唾液并准备9只试管 0.25ml 唾液（自制放入试管中），到50ml容量 瓶中定容，制成稀释200倍的唾液 注意事项：气泡不算，否则淀粉酶的量不够 3、检验淀粉的水解程度 （预实验） 确定在最适pH6.8 条件下淀粉刚刚被降解完所需要的 时间，而其余pH条件下淀粉没有被完全降解，从而显现出 颜色差异。 取缓冲液3ml，分别注入5 ′试管