folin酚法测蛋白（生化实验）2014生物化学实验报告册模板.docVIP

生物化学实验报告 姓 名： 毕佳琦 学 号： 3150034062 专业年级： 2015级医学检验技术 组 别： 第八实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 氨基酸薄层层析 实验日期 2016-10-25 实验地点 第四实验室 合作者 张恩铭 指导老师 孟 伟 评分 教师签名 批改日期 实验目的 1、掌握薄层层析法的一般原理。 2、掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。 3、掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。 二、实验原理 1.薄层层析法是色谱分析技术的一种： 一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来） 2.氨基酸与茚三酮显色反应： 茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。 3.混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—Rf值（rate of flow）来表示： 层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。 三、材料与方法： 1、分析样品：氨基酸混合液 2、吸附剂：硅胶 3、粘合剂： 0.5%的羧甲基纤维素钠 4、氨基酸的异丙醇溶液：丙氨酸、精氨酸、甘氨酸 5、展开-显色剂（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液） 6.器材：层析板、尺子、铅笔、烧杯、玻棒、量筒、吹风机、毛细管、层析缸、药匙、烘箱 实验步骤：  结果与讨论： 实验现象：随着层析液挥发运动不同氨基酸溶液在形成深浅不一，位置不一的紫红色斑点。 图1 实验现象 图2 实验数据 2、实验结果 ①.丙氨酸（Ala）：3.58cm ②.甘氨酸（Gly）：3.21cm ③.精氨酸（Arg）：2.10cm ④.混合溶液点1：3.92cm ⑤.混合溶液点2：3.27cm ⑥.混合溶液点3：2.10cm ⑦.溶剂前缘至样品原点的距离：7.70cm 再根据公式： 丙氨酸 甘氨酸 精氨酸 混合点1 混合点2 混合点3 斑点-原点a（cm） 3.58 3.21 2.10 3.92 3.27 2.10 溶剂前缘-原点b（cm） 7.70 各个斑点Rf值（a/b） 0.465 0.417 0.273 0.509 0.425 0.273 分析与讨论： 1、数据分析：由图表可知， 试验中出现的问题： 改进意见： 本次实验总结和收获： 总结；收获： 复习思考题 (硅胶的吸附力与含水量的问题 (吸附实验中吸附剂的选择根据 (氨基酸纸层析，两者有何区别 制版：调浆：称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维素钠8毫升，调成均匀的糊状 涂布 取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。 干燥 将玻璃板水平放置，室温下自然凉干。 活化 70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。 点样:位置：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约1cm。 取样：用毛细管分别吸取氨基酸溶液，取样量为毛细管柱高5cm。 点样：点样毛细管轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。 层析：将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析 缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线。 显色：用热风吹干或在85℃下烘干，即可显出各层斑点。 显色：用热风吹干或在85℃下烘干，即可显出各层斑点。 统计、计算数据，分析结果。