云芝菌丝体多糖的分离纯化研究.pdfVIP

天活产物研究与开发 2003 Vo1.15 Na.l NATf琅ALPRQDUCrPF4;ZPARCiANDDEVELOP[E NC 云芝菌丝体 分离纯化研究 余晓斌铃尤 蓉 (江南大学生物工程学院下AM 物技术教育部重点实验室 江苏无锡 214036 摘 要 利用热水抽提从云芝菌丝体中提取胞内多糖，初步纯化后，用DEAE-SephamseC1,6B进行分 离，从中分离出两个带电荷多糖组分即CvP-I和CvP-II，对这两个组分分别用SepharoseCI-6B凝胶 柱层析进行纯度鉴定，均出现单一峰，然后用紫外扫描发现这两个组分均出现蛋白多糖的特征吸收，从 而可以判断这两个组分是蛋白结合多糖。 关键词 云芝;蛋白多糖 云芝多糖是从云芝中提出的多糖，也可以从人 1.2.2 多糖定贡浏定:硫酸一苯酚法闹 工培养的菌丝体中提取，是一种新型的抗肿瘤免疫 1.2.3 蛋白质去除:Sevag试剂与多糖水溶液混 调节剂[l1。从菌丝体中提取的胞内多糖是含蛋白 合，直至中间层不形成白色沉淀为止川 质的糖肤，主要成分以件(1,4),件(1,3)或件(1,4), 1.2.4 样品脱色:往多糖水溶液中在声 8下滴加 终(1,6)为主链，上有 昆(1,3)或件(1,6)结合的分 20%的氏q[81 枝，多糖含量30-60%，蛋白质含量 10-30%，单糖 1.2.5 益析去除盐及小分子:样品溶液装人透析 组成主要是葡萄糖，其次为甘露糖，少量的半乳糖、 袋，扎紧袋口，悬浮于纯净水中，每8个小时换水一 木糖和岩藻糖。云芝糖肤能抑制人肺癌、胃癌、白血 次，透析3天。 病、淋巴癌细胞及腹水癌等多种癌细胞的增生z一习。 1.2.6 X子交换色谙法一DEAFSepharoseCL6B 因此，对于云芝多糖的分离纯化和结构研究具 离子交换柱层析 有重要意义。 柱规格:2.6x50cm;Vt=240ml;流速:1.67 ml/min;上柱体积:12ml;每管收集5ml 1方法与材料 洗脱方法:首先用500rnl水洗脱，然后用NaCl 1.1试荆与材料 溶液进行梯度洗脱。 DEAISepharoseCL-6B:Sigma公司;Sepharose 1.2.7 凝胶过滤色语-SepharoseCL6B凝胶柱层 CL6B:Sigma公司透析袋:Sigma公司;均质机; 析I91 SBS100数控计滴自动部份收集器:上海沪西仪器 1.2.8 紫外扫描:对样品水溶液在190--360run 厂;100型崛动泵:上海青浦沪西仪器厂;721分光光 区间进行扫描。 度计:上海第三分析仪器厂;梯度混合器:上海沪西 2 实验结果与讨论 仪器厂;旋转蒸发器:上海医疗器械厂;紫外扫描仪 HITACHI旧本。 在整个分离纯化的过程中，总共包括以下几个 1.2 实验方法 步骤: 1.2.1菌丝体胞内多糖的提取，采用热水抽提，具 (1)初步纯化:酒精沉淀粗多糖~粗多糖重新溶 体流程如下: 于水，收集滤液~浓缩一多糖水溶液”脱蛋白‘脱 发酵液斗离心一菌体~洗涤 ‘调配~破碎 ‘热 色~脱盐。 水~抽提冲离心一收集滤液 ‘浓缩~酒精沉淀”胞 (2)精制分离:利用DEAE-SepharoseCL-6B离 内粗多糖 子交换色谱，对中性多搪和离子多糖进行分离。 2.1DEAE-SepharoseCLBB离