苦楝皮妊娠毒性作用及对妊娠早期小鼠子宫局部免疫状态的影响研究.pdfVIP

2004学术年会 苦楝皮妊娠毒性作用及对妊娠早期小鼠子宫 局部免疫状态的影响8 翟向和1，宫新城1，李清艳1，李新民1，刘占民1，钟秀会1’2” 1河北衣业大学中兽医学院，河北定州073000；2河北农业大学动物科技学院，河北保定071001 摘要：给孕7d小鼠灌服苦楝皮(1：1)水煎剂，观察孕鼠的胚胎存活情况，免疫组化方法检测 坏死因子一d)含量。研究表明苦楝皮对妊娠早期小鼠有明显的致流产作用，使子宫NK细胞数量， IFN—Y、TNF—c【含量显著升高，证明苦楝皮致流产的机理与增强子宫局部的Thl反应有关。 关键词：苦株皮；小鼠；NK细胞；v．干扰素；肿瘤坏死因子．d：流产 toosendSieb．et 苦楝皮为楝科楝属植物苦楝树(MeliaazedarachL．)及川楝树(Melia Zucc．) 的根皮及树皮。昧苦、性寒，有毒，为杀虫燥湿之良药。主治蛔虫，亦可驱蛲虫，治游风热毒、风 』|J楝素纯品为白色针状晶体，无色、无臭、味苦，易溶于乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等，最早于 1953年由四川省中药研究所提取，主要用来驱虫。近年来用于农业杀虫。但川楝素对哺乳动物有一 67± indica 猫、猴、犬、兔、大鼠、小鼠。国外很早就开始对楝科植物印楝(AzadirachtaA．Juss)的研 究，尤以印度对印楝的研究最为活跃和深入，发现印楝素对妊娠有影响，可以导致大鼠妊娠100％ 终止。JI『楝素和印楝素同属于四环三萜类化合物，其化学结构及生物活性有许多相似之处。苦楝皮 是否有妊娠毒性作用?其毒性物质究竟如何影响子宫局部免疫细胞和细胞因子?二者有无内在联 系?本研究主要探讨苦楝皮的致流产作用及其对子宫局部免疫状态的影响。 1材料和方法 1．1材料 1．1．1试验动物 选取8周龄未经产纯种昆明系小鼠，购自河北医科大学。常规饲养l周后，眼观检查结合阴道 涂片作发情鉴定。阴道涂片经姬姆萨染色，镜下观察全部为无核角化上皮细胞定为发情，与公鼠l：l 合笼过夜，于次日清晨检查，见有阴栓者记为孕0d。 1．1．2试验药品 有限责任公司；生物素化山羊抗小鼠IgM，购自北京中山生物技术有限公司；链菌亲和素—辣根过氧化 物酶免疫组化染色超敏试剂盒，购自福卅『迈新生物技术开发公司；蛋白酶抑制剂(PMSF)，购自保定市 海泰克生物技术公司；Paraplast包埋蜡，购自美国sigma公司；多聚赖氨酸处理的载玻片，购自北京 ‘基金项目：国家自然科学基金资助(No ¨通讯作者。作者简介：翟向和(1968．)，男，汉族，河北饶阳县人，硕士，副教授，从事兽医中药学研究。 2004学术年会 中山生物技术有限公司；10％的小牛血清，购自博爱欣生物技术有限责任公司；苦楝皮，从定州市大世 界中药专柜购入，水浸lh后，水煎2次，合并滤液，浓缩至lml含生药19。 1．2方法 1．2．1试验动物分组与处理 经预试验发现，每只孕鼠灌服苦楝皮水煎液o．5mi，致流产效果较好。故将苦楝皮水煎液灌服 剂量选定为o．5ml。将孕7d小鼠随机分为2组，第1组为试验组，分别灌服苦楝皮水煎液o．5“； 第2组为对照组，分别灌服蒸馏水o．5mi。分别于灌药后6、9、12、24h剖杀小鼠。取右侧子宫角 匀浆，测定细胞因子的含量；取左侧子宫角用波恩(Bouin)液固定，做免疫组化试验。 1．2．2流产判定 胚胎体积变小、颜色紫黑、出血坏死、呈血团状、镜检无胎膜结构者为胚胎吸收或死亡。胚胎 个体大，粉红色，镜检胎膜及胎儿轮廓清晰，无出血、瘀血者为正常胚胎。 1．2．3切片制备 m纵切组织片，粘贴于多聚赖氨酸处理的载玻片上，56。Clh烘干，备用。 1．2．4免疫组化染色 应用LSAB法(Labelled 下统计CD57+细胞总数(计数20个视野)。 1．2．5 IFN-Y、TNF-a的测定 取右侧子宫，剪除子宫系膜及脂肪，纵向切开子宫，剥去胎儿，剪碎子宫角，加入5倍于