基于LuminolHlt2gtOlt2gt化学发光的NO光传感器研究.pdfVIP

no I—H20。化学发光的N0光传感器 基于Lumi 周李承，康新江，蒋易，郝巧玲，任恕，周宜开 e-mail：zhourising@yahoo．com．cn [摘要]一氧化氮是重要的细胞信使分子，本研究利用Lu疵01．H202化学发光分析技术构建了 一种能够快速检测NO的光传感器。通过测量NO标准系列证实该传感器具有响应快、灵敏度 高等优点。 [关键词]一氧化氮化学发光光传感器 引言 现代医学研究表明，在生物体内，一氧化氦合酶(NOS)以L-精氨基为底物催化生成一 氧化氮(nitricoxide，NO)。NO作为生物体内一种重要的信使分子和效应分子，在体内广泛的 生理和病理过程中发挥着重要的作用。但NO是一种自由基分子，其化学性质非常活泼，半衰 期短(约6秒)，且在生物体内含量较低，从而给准确测量带来极大困难，成为在与NO有关 NO的金标准，具有灵敏度高，特异性好等特点。在本实验中我们设计并建立了用于检测NO 的LllInin01．H202化学发光传感器，经过试验检测，获得较好效果。 1．材料与方法 1．1主要试剂与仪器 氯硅烷(上海试剂一厂)，PVC镀膜溶液由任恕教授惠赠，其它试剂均为国产分析纯。实验用 水均为二次蒸馏水。 NARISHIGE 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，氩气(普氩，99．5％，武钢氩气厂)。 1．2发光液的配制及luminoI-Hz02反应体系最佳反应条件的选择 umo]／l的luminol、 发光液由鲁米诺，过氧化氢和缓冲溶液组成。发光体系各组分为10 20．0mmol／l lff5moFl 1-1202、1．0x EDTA溶液、pH=10．20碳酸盐缓冲溶液。 1 3NO标准溶液的制备 lO—mol／1，300C 按文献”“1方法制备NO及其饱和溶液(此饱和溶液在200c浓度为2．ox 浓度为1．7×10。mol／lⅢ1)。取lO支带有橡皮塞且密闭良好的玻璃管，分别装二次蒸馏水，先经 超声脱气15rain，然后通氧气30min以除去水中溶解的氧气。以微量加样器向10支小玻管中 分别加5ul、10pl、15p1、20ul、25 混匀，配制成NO标准溶液系列，密闭40C避光保存备用。 1．4硝普钠溶液的制备 硝普钠用5％的葡萄糖稀释为5mg／1(该药品避光只能保存12h，故需临用临配)。 1 5传感器的制作 HCl 将内径为0．9—1．Imm的玻璃毛细管用光纤拉制仪拉制成所需探针，将其在0．10mol／L 第八届全国敏感元件与传感器学术会议论文集 中浸泡20min，用无水乙醇洗三次，室温空气干燥。 KOH15ml，若再次出现沉淀，复滴加氨水使其 沉淀(水合氧化银)刚刚溶解，加入0．80M 0．25M 溶解，此溶液即为银氨溶液。将拉制好的探针两端蜡封后放入银氨溶液中，并加入5ml 葡萄糖溶液，轻轻振荡，微热3分钟，即在探针外表面镀上一层光亮的银膜。 将二甲二氯硅烷稀释于三氯甲烷中至5％浓度配成硅烷液。在通风橱内将探针头部浸没 于硅烷液中，静置3min后通风抽气2h，180。C烘2b。 聚氯乙烯加增塑剂溶解于四氢呋喃中配制成PVC镀膜溶液。在硅烷化后探针内注入 Lumin01．H202化学发光液后，将其头部轻蘸于PVC镀膜溶液，取出，室温空气干